胰島素控制下糖尿病大鼠快速上頜擴(kuò)弓后的骨代謝變化.pdf

1、目的：隨著人們生活水平的日益提高，糖尿病的患病率與日俱增，且患病年齡也有逐漸降低的趨勢(shì)。糖尿病患者的正畸治療已被口腔正畸學(xué)領(lǐng)域所關(guān)注。上頜骨快速擴(kuò)弓已成為一項(xiàng)在臨床上廣泛使用的正畸技術(shù)，但糖尿病常易合并骨質(zhì)疏松，而骨質(zhì)疏松也會(huì)相應(yīng)加速骨吸收，而這對(duì)快速擴(kuò)弓又會(huì)產(chǎn)生不利的影響，因此通過(guò)快速擴(kuò)弓的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究，為糖尿病患者正畸擴(kuò)弓的臨床應(yīng)用提供大量的科學(xué)依據(jù)和統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)就顯得尤為必要。本課題旨在建立大鼠環(huán)圈式擴(kuò)弓的模型，探討糖尿病大鼠與正常大

2、鼠、經(jīng)胰島素控制的糖尿病大鼠的擴(kuò)弓效果及擴(kuò)弓后的骨代謝的變化，為臨床糖尿病患者的上頜快速擴(kuò)弓治療提供基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)理論依據(jù)。 方法：健康雄性5周齡SD大鼠72只，體重200-220克，隨機(jī)分為3組，正常對(duì)照組(A組)24只，糖尿病組(B組)24只，糖尿病胰島素治療組(C組)24只。每組隨機(jī)分為兩組，即擴(kuò)弓組8只、保持組16只。B、C組大鼠空腹一次性腹腔內(nèi)注射60mg/kgSTZ溶液，A組給予同等劑量的緩沖液腹腔注射，72h后取尾靜脈血

3、進(jìn)行血糖測(cè)定，將血糖>16.7mmol/L，尿糖>+++定為糖尿病動(dòng)物模型。糖尿病模型成模后C組大鼠即開始用胰島素控制血糖，范圍為8-10mmol/L。A組、B組給予同等劑量的生理鹽水注射。糖尿病模型成模21天后各組大鼠上裝置，用0.45mmSS圓絲彎制兩眼簧擴(kuò)弓器，臂長(zhǎng)約10mm，末端回折插入第一、二磨牙鄰接點(diǎn)之下，臂擴(kuò)展開5mm，可以產(chǎn)生200g的力值，每3d加力一次，力值保持200g不變。擴(kuò)弓7天后全麻下頸動(dòng)脈取血處死A、B、C組

4、中的擴(kuò)弓組，每只大鼠取血約10毫升，低溫離心留取血清，取部分血清用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定血清鈣、磷、堿性磷酸酶的含量，部分血清用全自動(dòng)放免儀測(cè)定血清降鈣素的含量；每只大鼠取血后立即剝離腭骨組織，電子天平分別稱重，然后按1ml/mg的比例在骨組織中加入生理鹽水并于低溫下快速搗成勻漿，低溫離心后提取上清液，放免法測(cè)定組織中的降鈣素含量。 擴(kuò)弓7天后A、B、C組中的保持組大鼠將擴(kuò)弓裝置兩眼簧的圈用自凝塑料粘固作為保持器，保持21天。保持

5、組分別在擴(kuò)弓結(jié)束和保持結(jié)束前第4天、第3天全部大鼠給予四環(huán)素每天30mg/kg，分兩次灌胃。保持21天后全麻下頸動(dòng)脈取血處死各組大鼠，每只大鼠取血約10毫升，低溫離心留取血清，取部分血清測(cè)定血清鈣、磷、堿性磷酸酶的含量，部分血清測(cè)定血清降鈣素的含量；各保持組分別取8只大鼠的腭骨組織，放免法測(cè)定組織中的降鈣素含量。各保持組分別取8只大鼠的腭骨，在第一對(duì)磨牙水平連線處切片，制備20μm厚的四環(huán)素?zé)晒鈽?biāo)記不脫鈣骨磨片及甲苯胺藍(lán)染色切片。

6、 結(jié)果：1生化指標(biāo)：擴(kuò)弓組的血清鈣含量，B組較A、C組高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p<0.05)；保持組的血清鈣含量，B組較A、C組高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p<0.05)。擴(kuò)弓組的血清磷含量，B組較A、C組低，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p>0.05)；保持組的血清磷含量，B組較A、C組低，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p>0.05)。擴(kuò)弓組的血清堿性磷酸酶含量，B組較A組、C組高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p<0.01)；保持組的血清堿性磷酸酶含量，B組較A組、C組高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p

7、<0.01)。A組血清鈣、磷、堿性磷酸酶在擴(kuò)弓組和保持組均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p>0.05)；B組血清鈣、磷、堿性磷酸酶在擴(kuò)弓組和保持組均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p>0.05)；C組血清鈣、磷、堿性磷酸酶在擴(kuò)弓組和保持組均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p>0.05)。 2 血清降鈣素含量：放免法測(cè)定血清降鈣素含量，擴(kuò)弓組的血清降鈣素含量，A組與C組無(wú)顯著性差異(p>0.05)，B組降鈣素含量低于A組、C組，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p>0.05)。保持組的血清降鈣素含量，C組低

8、于A組，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p>0.05)，B組降鈣素含量較A組、C組低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p<0.01)。A組的擴(kuò)弓組和保持組間血清降鈣素含量無(wú)顯著性差異(p>0.05)，B組的擴(kuò)弓組和保持組間血清降鈣素含量有顯著性差異(p<0.05)，C組的擴(kuò)弓組和保持組間血清降鈣素含量無(wú)顯著性差異(p>0.05)。 3 組織降鈣素含量：放免法測(cè)定腭骨組織降鈣素含量，擴(kuò)弓組的組織降鈣素含量，C組稍低于A組，但無(wú)顯著性差異(p>0.05)，B組降鈣素

9、含量低于A組、C組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p<0.01)。保持組的組織降鈣素含量，C組低于A組，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p>0.05)，B組降鈣素含量較A組、C組低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p<0.01)。A組的組織降鈣素含量，保持組高于擴(kuò)弓組，但無(wú)顯著性差異(p>0.05)；B組的組織降鈣素含量，擴(kuò)弓組和保持組無(wú)顯著性差異(p>0.05)；C組的組織降鈣素含量，保持組高于擴(kuò)弓組，但無(wú)顯著性差異(p>0.05)。 4 四環(huán)素?zé)晒鈽?biāo)記不脫鈣骨磨片：不脫鈣切

10、片，在熒光顯微鏡下可見骨小梁表面有金黃色或黃綠色的四環(huán)素標(biāo)記線，于近腭中縫附近，可見兩條較為清晰的金黃色熒光帶，兩條熒光帶間的距離即21天骨組織的總礦化量，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，A組的礦化沉積速率與C組的礦化沉積速率無(wú)顯著性差異(p>0.05)，B組的礦化沉積速率低于A組、C組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p<0.05)。A組，在骨小梁邊緣可見大量致密的黃色熒光，B組，骨小梁邊緣可見分布不均一較致密的黃色熒光，C組，骨小梁邊緣可見大量致密的黃色熒光。

11、 5 不脫鈣骨磨片甲苯胺藍(lán)染色切片：礦化骨痂為淺藍(lán)色至白色，成骨細(xì)胞為深藍(lán)色，破骨細(xì)胞為淡藍(lán)色，體積較大，多核。A組，骨染色均勻，腭骨組織骨纖維成束狀排列，腭中縫區(qū)邊緣可見大量排列整齊的成骨細(xì)胞，偶可見破骨細(xì)胞。B組，骨染色不均一，腭骨組織骨線紊亂，纖維不規(guī)則排列，破骨細(xì)胞較A組和C組多，成骨細(xì)胞較少且形態(tài)不規(guī)則。C組與A組無(wú)明顯差別，骨線較為規(guī)整，大量骨纖維成束狀排列，可見大量成骨細(xì)胞規(guī)則排列于腭中縫表面，可見少量破骨細(xì)胞。