結(jié)核桿菌抗原Ag85B誘發(fā)抗腫瘤免疫應(yīng)答及其機(jī)制研究.pdf

1、目的:通過(guò)對(duì)BCG Ag85B基因克隆、真核載體構(gòu)建、轉(zhuǎn)染B16細(xì)胞和其促增殖活性的研究,進(jìn)一步探討Ag85B在誘發(fā)抗腫瘤免疫應(yīng)答中的作用,及其用于腫瘤免疫治療的可行性研究.結(jié)論:(1)BCG和結(jié)核桿菌的Ag85B的堿基序列和氨基酸序列差別甚微,結(jié)核桿菌成功培養(yǎng)需要一個(gè)多月時(shí)間,培養(yǎng)條件和培養(yǎng)環(huán)境要求較嚴(yán)格,該研究Ag85B DNA的提取選用BCG,一方面BCG使用比較安全;另一方面BCG防疫部門(mén)有售,不需要培養(yǎng)結(jié)核分枝桿菌,節(jié)約時(shí)間.

2、(2)該研究成功地從BCG中提取DNA并進(jìn)一步擴(kuò)增了Ag85B基因,鑒定了其序列的正確性,并且構(gòu)建了重組pcDNA<,3>-Ag85B真核載體,轉(zhuǎn)染B16細(xì)胞獲得了陽(yáng)性細(xì)胞克隆,用Western blotting鑒定在陽(yáng)性細(xì)胞克隆內(nèi)有Ag85B表達(dá);此陽(yáng)性細(xì)胞克隆對(duì)PPD<'+>人的PBMC具有較明顯地促增殖活性,為Ag85B誘發(fā)抗腫瘤免疫應(yīng)答及其機(jī)制的研究奠定了基礎(chǔ).(3)小鼠背部皮下接種B16細(xì)胞,8日后小鼠背部皮下再次分別接種相同

3、數(shù)量B16細(xì)胞(對(duì)照組)、B16(pcDNA<,3>)細(xì)胞(對(duì)照組)和B16(pcDNA<,3>-Ag85B)細(xì)胞(試驗(yàn)組).結(jié)果為,13日內(nèi)對(duì)照組和試驗(yàn)組小鼠血清中IFN-γ含量均有所上升,隨后對(duì)照組小鼠血清中IFN-γ含量均呈現(xiàn)下降趨勢(shì),而試驗(yàn)組小鼠血清中IFN-γ含量則呈上升趨勢(shì);13日內(nèi)對(duì)照組和試驗(yàn)組小鼠血清中IL-4含量均有輕微升高,隨后逐步下降,兩組小鼠血清中IL-4含量變化差異不明顯.試驗(yàn)組小鼠血清中IFN-γ明顯增高,而

4、IL-4水平較低,顯示出Ag85B誘發(fā)荷瘤小鼠Th1型細(xì)胞免疫應(yīng)答,從而較有效抑制荷瘤小鼠體內(nèi)的腫瘤生長(zhǎng),并且荷瘤小鼠生存時(shí)間也有較明顯的延長(zhǎng).(4)小鼠尾靜脈注射B16細(xì)胞,8日后再次分別注射相同數(shù)量經(jīng)照射的B16(pcDNA<,3>)細(xì)胞(對(duì)照組)和經(jīng)照射的B16(pcDNA<,3>-Ag85B)細(xì)胞(試驗(yàn)組).結(jié)果為,對(duì)照組小鼠在第18日肺部開(kāi)始出現(xiàn)2個(gè)腫瘤結(jié)節(jié),在第23日肺部出現(xiàn)6個(gè)直徑3mm的腫瘤結(jié)節(jié);而試驗(yàn)組小鼠在第18日肺