組蛋白乙?；?、甲基化改變對酵母細(xì)胞生長和GALI、SSA3基因表達(dá)的影響.pdf

1、目的：Elongator復(fù)合物作為高度磷酸化的RNAP II全酶的一部分于1999年從酵母染色質(zhì)的延伸復(fù)合物中被首次分離出來，較多的證據(jù)表明該復(fù)合物在染色質(zhì)模板的轉(zhuǎn)錄延伸中具有功能。Elp3是高度保守的組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物Elongator的催化亞基，參與tRNA的修飾、胞外分泌及α-tublin的乙?；癛NAPII的轉(zhuǎn)錄延伸等重要生物過程。同時通過對組蛋白乙?；揎?，影響基因轉(zhuǎn)錄進(jìn)而影響細(xì)胞生長。 研究表明，組蛋白特定位點(diǎn)

2、(如：H3K4，H3K36，H3K4/K36，H3K14，H4K8，H3K14/H4K8)的乙?；?、甲基化修飾對細(xì)胞的生長和基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控有著重要影響。為研究不同修飾位點(diǎn)功能的差異，我們構(gòu)建了不同組蛋白乙?；?、甲基化位點(diǎn)突變菌株，并對其進(jìn)行敏感性實(shí)驗(yàn)及誘導(dǎo)基因表達(dá)分析，以便深入了解組蛋白乙?；谆闹匾δ?。 已知野生情況下，Elp3參與SSA3等基因的轉(zhuǎn)錄延伸。本論文以組蛋白乙?；⒓谆稽c(diǎn)(H3K4，H3K36，H3K4

3、/K36，H3K14，H4.K8，H3K14/H4K8)突變的elp3△菌株為實(shí)驗(yàn)材料，通過染色質(zhì)免疫沉淀實(shí)驗(yàn)確定特定組蛋白乙?；图谆稽c(diǎn)突變條件下，全長及HAT區(qū)缺失、第二結(jié)構(gòu)域缺失的Elp3是否參與GAL1和SSA3等的轉(zhuǎn)錄延伸。這些研究對于建立酵母Elongator通過表觀遺傳修飾參與基因表達(dá)調(diào)控的模型，進(jìn)一步研究人Elongator功能、探索與其功能異常相關(guān)的疾病的發(fā)生機(jī)理具有重要意義。 方法：通過敏感性實(shí)驗(yàn)和基因表

4、達(dá)分析研究組蛋白H3/H4上不同的乙?；⒓谆稽c(diǎn)突變對細(xì)胞生長和GAL1基因轉(zhuǎn)錄的影響。運(yùn)用Elp3抗體對轉(zhuǎn)入Elp3系列質(zhì)粒的組蛋白突變elp3△菌株進(jìn)行染色質(zhì)免疫沉淀，以Input DNA和沉淀DNA作模板進(jìn)行特異引物的PCR，確定組蛋白特定乙?；?、甲基化位點(diǎn)突變對Elp3的功能和SSA3、GAL1等基因轉(zhuǎn)錄的影響。 結(jié)果：1、在供試的各條件下，H4K8、H3K14以及H4K8/H3K14三種組蛋白乙酰化位點(diǎn)突變株的生長

5、情況均不如野生型；其中雙突變株D814生長最慢，特定條件下單突變株s8均比S14稍慢，S8的GAL1表達(dá)明顯慢于S14。表明組蛋白H4K8和H3K14的乙?；揎棇?xì)胞維持正常生長非常重要?？赡蹾4K8的修飾比H3K14作用更大。 2、在供試的各條件下，三種組蛋白甲基化位點(diǎn)突變株的生長情況均不如野生型；其中雙突變株D436生長最慢，單突變株S4比S36稍慢。其GALI基因表達(dá)情況與表型基本一致。表明組蛋白H3K4和36的甲基化修