異甘草素誘導(dǎo)宮頸癌細(xì)胞半胱天冬酶依賴性凋亡機(jī)制.pdf

1、目的：本實(shí)驗(yàn)以宮頸癌細(xì)胞株Hela細(xì)胞和維吾爾族宮頸癌患者中提取培養(yǎng)的原代宮頸癌細(xì)胞作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，研究異甘草素(ISL)抑制宮頸癌細(xì)胞增殖作用及促進(jìn)細(xì)胞凋亡作用機(jī)制。
　　方法：1.體外培養(yǎng)宮頸癌Hela細(xì)胞和原代細(xì)胞，用倒置光學(xué)顯微鏡觀察細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化；2.不同濃度ISL處理Hela細(xì)胞和原代細(xì)胞，采用MTT法檢測(cè)I SL對(duì)細(xì)胞體外增殖的抑制作用；3.應(yīng)用流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測(cè)ISL對(duì)Hela細(xì)胞和原代細(xì)胞凋亡和周期的影響；4.通

2、過(guò)caspase-3、8、9活性試劑盒測(cè)定ISL對(duì)Hela細(xì)胞半胱天冬酶活性的影響；5.應(yīng)用羅丹明123染色法檢測(cè)Hela細(xì)胞線粒體跨膜電位的變化；6.采用RT-PCR檢測(cè)ISL對(duì)BCL-2，P53，P21,HPV18-E6mRNA基因表達(dá)的影響。7.應(yīng)用免疫印跡技術(shù)檢測(cè)ISL對(duì)BCL-2，P53，P21蛋白的表達(dá)情況；
　　結(jié)果：1.MTT檢測(cè)結(jié)果表明：不同濃度的ISL作用于Hela細(xì)胞和原代細(xì)胞24h，48h,72h具有體外增

3、殖的抑制作用(P<0.01)；2.流式細(xì)胞儀檢測(cè)： ISL誘導(dǎo)Hela細(xì)胞和原代細(xì)胞凋亡，與空白對(duì)照組相比有極顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，且凋亡率呈濃度依賴性；隨著ISL濃度的增加，Hela細(xì)胞和原代細(xì)胞的S期細(xì)胞增多，Go/Gl期細(xì)胞減少，細(xì)胞周期阻滯在S期；3.Caspase-3、8、9的活性測(cè)定表明：各個(gè)濃度的ISL作用于Hela細(xì)胞與陰性對(duì)照組相比，Caspase-3、8、9的活性明顯增高，且隨著ISL濃度的增加，藥物促進(jìn)

4、細(xì)胞凋亡(F=57.787、F=55.148、F=49.610.148，P<0.01)；4.羅丹明123熒光染色檢測(cè)結(jié)果:Hela細(xì)胞線粒體膜電位隨著藥物濃度上升反而下降(F=118.904，P<0.01)；5. RT-PCR結(jié)果：藥物劑量越增高HPV18-E6、BCL-2基因表達(dá)越下降(F=245.905、F=95.718，P<0.01)，P53、p21mRNA基因表達(dá)越升高(F=28.158、F=24.374，P<0.01)。6.W

5、estern-blot法檢測(cè)表明ISL促使BCL-2蛋白表達(dá)水平降調(diào)，P53、P21蛋白表達(dá)水平上調(diào)，與對(duì)照組有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；
　　結(jié)論：
　　1.異甘草素對(duì)人宮頸癌Hela細(xì)胞和原代細(xì)胞的增殖有較強(qiáng)的抑制作用，且呈一定的劑量和時(shí)間依賴性。
　　2.異甘草素能使宮頸癌HeLa細(xì)胞和原代細(xì)胞誘導(dǎo)并促進(jìn)凋亡，細(xì)胞凋亡率呈一定的劑量依賴性；且能使周期阻滯于S期。
　　3.異甘草素能激活宮頸癌HeLa細(xì)胞線