川芎嗪及其硝酮衍生物對HCN4通道和竇房結(jié)細(xì)胞起搏電流的抑制作用.pdf

1、目的：探討川芎嗪（Ligustrazine，TMP）及其硝酮衍生物（TBN）對超極化激活環(huán)核苷酸門控陽離子通道（hyperpolarization-activated cyclic nucleotide-gated cation channel，HCN）基因家族亞型HCN4參與編碼的超極化激活的陽離子通道電流（If）和家兔竇房結(jié)細(xì)胞動作電位的影響。
　　方法：利用標(biāo)準(zhǔn)的雙極電壓鉗和標(biāo)準(zhǔn)玻璃微電極技術(shù)記錄表達(dá)在非洲爪蟾卵母細(xì)胞上的H

2、CN4通道電流以及家兔竇房結(jié)動作電位。
　　結(jié)果：正常表達(dá)在卵母細(xì)胞上的HCN4通道電流，給予1μM、10μM、100μM川芎嗪（TMP）后，以濃度依賴性方式阻斷HCN4參與編碼的If電流，其半數(shù)最大效應(yīng)濃度[IC50]為48.79±3.1μmol/L，希爾系數(shù)為1.01±0.3。另一組實驗中，1μM、10μM、100μM TBN同樣以濃度依賴性方式減小If電流，其[IC50]值為17.20±1.1μmol/L，希爾系數(shù)為1.01

3、±0.4。此外，在家兔竇房結(jié)動作電位實驗中，100μM TMP使家兔竇房結(jié)細(xì)胞動作電位（Action potential, AP）4期自動去極化速率（phase-4 spontaneous depolarization rate，DDR）由正常的19.53±1.2 mV/s減小到13.79±1.0 mV/s，而100μM TBN可使DDR從正常的21.16±1.4 mV/s減少到7.10±1.9 mV/s。為了進一步證實TBN強大的抗氧

4、化作用，我們在竇房結(jié)AP實驗中預(yù)先給予100μM過氧化氫（H2O2）灌流，然后分別加入100μM TMP和100μM TBN以觀察其作用效果。結(jié)果顯示：100μM H2O2明顯加快竇房結(jié)4期DDR，從正常的20.98±1.28 mV/s和21.66±1.1 mV/s增加到33.24±2.3 mV/s和35.71±2.1 mV/s（n=6，P<0.01 versus Control）。給予100μM TMP后，4期DDR從33.24±2.

5、3 mV/s降低到23.57±2.44 mV/s（n=6，P<0.01 versus H2O2）；而100μM TBN明顯減小H2O2誘導(dǎo)增大的4期DDR（35.71±2.1 mV/s to12.27±2.23 mV/s，n=6，P<0.01 versus H2O2）。
　　結(jié)論：①TMP及TBN對表達(dá)在卵母細(xì)胞上HCN4參與編碼的超極化激活的陽離子通道電流（If）和家兔竇房結(jié)AP DDR均有明顯的抑制作用；②還可降低H2O2誘導(dǎo)