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文檔簡(jiǎn)介
1、[目的]觀察低剪切應(yīng)力對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)自噬的影響并探討其機(jī)制。
[方法](1) apoE-/-小鼠喂飼高脂飲食，分別于0、4、8和12周處死，取主動(dòng)脈竇部做冰凍切片，主動(dòng)脈提蛋白。HE和油紅O染色法觀察動(dòng)脈粥樣硬化(Atherosclerosis，As)斑塊病變；免疫組織化學(xué)法和Western blot檢測(cè)BECLIN1、LC3和P62以及TET2的蛋白表達(dá)；免疫熒光法觀察5-mC和5-hmC的含量。(2)將
2、HUVECs置于體外灌流系統(tǒng)，分別以低剪切應(yīng)力(5 dyne/cm2)和正常剪切應(yīng)力(15 dyne/cm2)處理1h，Western blot檢測(cè)BECLIN1、LC3和P62以及TET2的蛋白表達(dá)。再以巴伐洛霉素孵育2h，觀察LC3II/LC3I的比值。(3)低表達(dá)和高表達(dá)TET2質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HUVECs，Western blot檢測(cè)BECLIN1、LC3和P62的蛋白表達(dá)。再以不同剪切應(yīng)力處理1h，Western blot檢測(cè)BECL
3、IN1、LC3、P62和ET-1及eNOS的蛋白表達(dá)。
[結(jié)果]隨著高脂飲食時(shí)間的延長(zhǎng)，As病變程度逐漸加重。As病變進(jìn)程中BECLIN1、LC3和P62的蛋白含量顯著增加；TET2的蛋白表達(dá)明顯降低；5-mC的含量顯著增加，且其增加幅度顯著高于5-hmC。與正常剪切應(yīng)力組相比，低剪切應(yīng)力組BECLIN1和LC3II/LC3I的蛋白表達(dá)降低；自噬障礙標(biāo)志物P62的蛋白表達(dá)增加；TET2的蛋白表達(dá)降低。巴伐洛霉素孵育2h后，低剪
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