類姜黃素及其單體抑制Aβ-,42-生成作用的強弱比較及機制探討.pdf

1、阿爾茨海黙病(AD)是最常見的癡呆類型，目前廣泛認可的發(fā)病機制是β淀粉樣蛋白(Aβ)級聯假說，Aβ的聚集、纖維化、寡聚體形成被認為是AD病理的起始因素。Aβ由β-淀粉樣蛋白前體(APP)經β-分泌酶(BACE1)和γ-分泌酶酶切后生成的。常見的Aβ片段是Aβ40和Aβ42，Aβ42雖然所占的比例僅10％左右，但Aβ42比Aβ40更易聚集、纖維化，形成粥樣斑塊的核心，毒性作用更強。因此如何抑制Aβ42的生成或促進Aβ42的清除是目前研究的

2、熱點，期望以此尋找從源頭上阻斷疾病進展的藥物是治療AD的希望。體外實驗和體內實驗已證實姜黃素可抑制Aβ的產生，然而目前在AD相關的研究中應用的姜黃素多是類姜黃素化合物，為明確其單體成分的作用，我們課題組分離提純了類姜黃素(包括姜黃素Cur，去甲氧基姜黃素DMC，雙去甲氧基姜黃素BDMC)的三種單體成分，并且證實在swAPP HEK293(轉染APP基因瑞典突變型)細胞中，類姜黃素及三種單體成分劑量依賴性的抑制Aβ的生成。鑒于Aβ42在A

3、D病理中的核心作用，本實驗繼續(xù)比較了類姜黃素及單體成分對Aβ42的不同影響。研究表明姜黃素可以逆轉金屬離子、維甲酸及Aβ42誘導的APP和BACE1表達的上調，然而類姜黃素及其單體對APP及BACE1的直接影響尚未見報道，目前姜黃素抑制Aβ產生的機制尚不是很清楚。由此，提出了本實驗：
　　 目的：比較類姜黃素及其單體成分抑制Aβ42生成作用的強弱，期望找出最有效的單體成分；通過檢測藥物在mRNA和蛋白水平對APP及BACE1的直

4、接影響，探討其抑制Aβ生成的可能機制，為姜黃素應用于AD患者提供理論依據。
　　 方法：結合本課題組前期工作，選取的藥物終濃度為5μM，以5μM類姜黃素及單體成分或0.005％二甲基亞砜(對照組)作用于swAPP HEK293細胞24h后：①MTT法檢測細胞活性；②ELISA方法檢測細胞培養(yǎng)上清中分泌型Aβ42濃度；③RT-PCR方法檢測APP及BACE1 mRNA的水平；④Westem Blot檢測APP及BACE1蛋白水平的

5、表達;⑤運用Real-Time PCR初步研究了Cur對microRNAs中的miR17-5p和miR-106b的影響。
　　 結果：⑴5μM濃度的類姜黃素及單體對細胞活性無明顯影響，表明對細胞無毒性作用；⑵類姜黃素及其三種單體成分都可明顯抑制Aβ42的生成，作用強弱依次為Cur＞DMC＞類姜黃素＞BDMC；⑶類姜黃素及其三種單體成分對APP mRNA無影響；在蛋白水平僅Cur能抑制APP的表達，與對照組相比，差異有統(tǒng)計學意義；

6、⑷DMC及BDMC能降低BACE1 mRNA的表達，與對照組相比，差異有統(tǒng)計學意義；類姜黃素及Cur對BACE1 mRNA無影響。僅BDMC能抑制BACE1蛋白的表達，差異有統(tǒng)計學意義；類姜黃素、Cur及DMC對BACE1蛋白的表達無明顯影響。⑸Cur對miR17-5p和miR-106b無明顯影響。
　　 結論：①在swAPPHEK293細胞中，類姜黃素及單體抑制Aβ42生成作用的強弱順序為：Cur＞DMC＞類姜黃素＞BDMC；