絞股藍三萜皂苷合成途徑相關(guān)酶基因的克隆研究.pdf

1、本研究采用cDNA末端快速擴增(RACE)技術(shù)對絞股藍進行三萜皂苷生物合成途徑相關(guān)酶基因的克隆分析，成功克隆得到了2個三萜皂苷合成途徑相關(guān)酶的基因，進而為絞股藍三萜皂苷次生代謝途徑的研究奠定了基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下： (1)絞股藍總RNA提取和純化。運用改良的CTAB法提取絞股藍總RNA，獲得了純度高且完整的總RNA，可以直接用于后續(xù)RT-PCR和RACE反應(yīng)。 (2)根據(jù)Genbank中報道的已知植物SS、SE序列，同

2、源比對設(shè)計簡并引物，以cDNA為模板，經(jīng)PCR擴增、克隆獲得兩個三萜皂苷合成途徑功能酶基因的保守序列。擴增所得的絞股藍SS、SE部分保守序列，長度分別為443bp、535bp。 (3)采用RACE技術(shù)獲得絞股藍SS基因全長cDNA序列1496bp，開放讀碼框(ORF)為1254bp，編碼417個氨基酸殘基，推導的氨基酸序列與大豆(AB007503)、甘草(AM182331)、辣椒(AF124842)、三七(DQ186630)、人

3、參(AB010148)等氨基酸序列一致性分別達84.3％、83.3％、82.2％、82.2％、81.0％。 (4)采用RACE技術(shù)獲得SE基因全長1818bp，開放讀碼框(ORF)為1578bp，編碼525個氨基酸殘基酸殘基，推導的氨基酸序列與曼陀羅(AY995182)、水稻2(NM_001055998)、苜蓿1(AJ430608)、苜蓿2(AJ430609)、人參(AB122078)、三七(DQ386734)等氨基酸序列一致性

4、分別達80.2％、79.2％、78.6％、78.4％、77.3％、76.7％。上述獲得的絞股藍SS及SE序列信息已提交至GenBank，登錄號：SS(FJ906799)，SE(FJ906798)。 本研究首次采用RACE技術(shù)對絞股藍進行三萜皂苷生物合成途徑相關(guān)酶的克隆研究，為深入了解絞股藍三萜皂苷生物合成途徑及其調(diào)控的分子機制，明確三萜皂苷合成途徑功能酶的結(jié)構(gòu)特征及其功能，從而在分子水平上實現(xiàn)三萜皂苷生物合成的人工調(diào)控，提高其有