抗B7分子單克隆抗體與免疫抑制劑聯(lián)用對感染人巨細(xì)胞病毒的T淋巴細(xì)胞增殖影響及機(jī)理初探.pdf

1、移植物抗宿主病(graft versus host disease,GVHD)是由供者細(xì)胞識別宿主細(xì)胞表面抗原引起免疫反應(yīng),導(dǎo)致受者多臟器損傷,是同種異基因造血干細(xì)胞移植后的主要并發(fā)癥<'[1]>.如何改善或克服現(xiàn)用免疫抑制劑或方法存在的弊端,抑或創(chuàng)造出新一代理想、高效、低毒、能防治或減弱GVHD的新策略或措施,已成為迫切需要解決的問題.成熟T淋巴細(xì)胞在GVHD的發(fā)生與發(fā)展中起著核心作用,T淋巴細(xì)胞的激活不僅需要抗原特異性信號刺激,同時

2、需要共刺激信號瞳<'[2]>.CD28/B7就是一種主要的共刺激信號系統(tǒng).B7分子家族有二個重要的成員:B7-1和B7-2,屬于免疫球蛋白超家族.B7-1和B7-2的共同配體為T淋巴細(xì)胞表面的CD28以及僅存在于活化T淋巴細(xì)胞表面的CTLA-4.當(dāng)B7與CD28結(jié)合時,可產(chǎn)生第二活化信號.當(dāng)?shù)谝换罨盘柎嬖跁r,使相應(yīng)CD4<'+>細(xì)胞和CD8<'+>細(xì)胞克隆活化、增殖,并增加細(xì)胞表面多種粘附分子的表達(dá),加強(qiáng)細(xì)胞間的相互作用,同時促進(jìn)細(xì)胞

3、內(nèi)多種細(xì)胞因子基因表達(dá),從而促進(jìn)免疫反應(yīng)的發(fā)生和發(fā)展.先期研究已證實(shí),阻斷抗原遞呈細(xì)胞表面B7分子與T淋巴細(xì)胞表面CD28分子相互作用,即阻斷T淋巴細(xì)胞活化的必需的信號傳導(dǎo)途徑,可以誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生耐受<'[3]>.盡管B7-1和B7-2的結(jié)構(gòu)很相似,但仍顯示出不同的生化特性及作用<'[4]>.目前,對B7-1和B7-2分子的研究較多,但有關(guān)B7-1和B7-2作用差異的研究卻不多.重度GVHD可能與Th1亞群和Th2亞群所分泌的細(xì)胞因

4、子失去平衡有關(guān).移植物所含有CD4<'+>輔助性細(xì)胞(Th)識別宿主所表達(dá)的異源性主要和次要組織兼容性抗原而激活,進(jìn)而分泌可溶性細(xì)胞因子促進(jìn)宿主抗原特異性細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CTL)活性和遲發(fā)性超敏反應(yīng).CD4<'+>Th細(xì)胞克隆按其分泌細(xì)胞因子譜的不同,分為Th1和Th2兩種亞群.Th1亞群產(chǎn)生IL-2,INF-γ,LT,IL-3和GM-CSF,可促進(jìn)CTL細(xì)胞活性、DTH反應(yīng).Th1亞群促進(jìn)細(xì)胞免疫反應(yīng),是引發(fā)GVHD的主要細(xì)胞亞群

5、.Th2亞群主要產(chǎn)生IL-4、IL-5、IL-6和IL-10等細(xì)胞因子,促進(jìn)體液免疫反應(yīng)、免疫耐受以及粘膜免疫反應(yīng)等<['2]>.基于以上事實(shí),Th1和Th2亞群及其所分泌細(xì)胞因子在GVHD的發(fā)生與發(fā)展中的相互作用和關(guān)系的研究受到廣泛關(guān)注.混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(mixed lymptIOCyte reaction,MLR)是研究GVFlD中移植物對機(jī)體抗原識別反應(yīng)的一種重要體外模式.在該反應(yīng)體系中,淋巴細(xì)胞的增殖及某些細(xì)胞因子的釋放在某種程

6、度上代表了在體時的移植物抗宿主反應(yīng)<['2]>. 霉酚酸酯(Mycophenolate Mofetil,MMF)、環(huán)孢素A(Cyclosporine A,CsA)等是近年來防治GVHD的免疫抑制劑.霉酚酸酯是體內(nèi)活性物質(zhì)霉酚酸(mycophenolic acid,MPA)的酯類前體,MPA對淋巴細(xì)胞的嘌呤合成具有選擇性抑制作用<['5,6]>.環(huán)孢素A是從真菌分離出來的一種脂溶性環(huán)狀十一肽,可選擇性作用于T細(xì)胞,抑制其活化<['

7、7,8]>.人巨細(xì)胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)屬于β皰疹病毒家族成員之一,是一機(jī)會性致病原體,能長期潛伏在免疫功能完備的宿主體內(nèi),在人群中的感染率為70-100﹪.近年來,隨著造血干細(xì)胞移植臨床應(yīng)用日漸廣泛,由HCMV引發(fā)的嚴(yán)重并發(fā)癥逐漸增加,嚴(yán)重的GVHD是HCMV感染的高危因素之一陽<['9]>. 有研究表明,抗B7-1單抗聯(lián)合環(huán)孢素A可誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞耐受<['10]>.霉酚酸酯加短程氨甲

8、蝶呤成功地預(yù)防異基因骨髓移植時發(fā)生的GVHD<['11]>.但是,B7-1、B7-2單抗對共刺激途徑是否有不同的作用地位?對細(xì)胞因子表達(dá)的影響,能否抑制T淋巴細(xì)胞的增殖及活化?與環(huán)孢菌素A、霉酚酸酯是否有協(xié)同作用,以及人巨細(xì)胞病毒感染時對此作用的影響,尚未見文獻(xiàn)報道.本研究擬在體外建立同種異基因T淋巴細(xì)胞反應(yīng)系統(tǒng),分別觀察抗B7-1、B7-2分子的單抗以及兩種抗體聯(lián)用對T淋巴細(xì)胞的細(xì)胞增殖及效應(yīng)的影響,尤其是聯(lián)用MPA或CsA時,以及人

9、巨細(xì)胞病毒(HCMV)感染對此作用的影響,冀能為其臨床應(yīng)用提供較深入的理論基礎(chǔ). 本實(shí)驗(yàn)研究共分四部分: (一)、B7分子單抗對外周血T淋巴細(xì)胞功能及細(xì)胞因子表達(dá)的影響. (二)、B7分子單抗聯(lián)用霉酚酸影響T淋巴細(xì)胞增殖及細(xì)胞因子表達(dá). (三)、B7分子單抗聯(lián)用環(huán)孢素A對T淋巴細(xì)胞增殖及細(xì)胞因子表達(dá)的影響. (四)、初步探討HCMV感染細(xì)胞對B7單抗及免疫抑制劑作用的變化. 結(jié)論如下:

10、 1、在體外,單獨(dú)應(yīng)用抗B7-1或抗B7-2單抗以及兩者聯(lián)合均能抑制T淋巴細(xì)胞增殖,使T細(xì)胞處于免疫耐受狀態(tài).單獨(dú)應(yīng)用抗B7-1或抗B7-2單抗可以部分阻斷T細(xì)胞反應(yīng),抗B7-2單抗的阻斷作用更強(qiáng).聯(lián)合應(yīng)用兩種單抗則可加強(qiáng)阻斷T細(xì)胞在單向MLR中的增殖反應(yīng).此外,B7-1、B7-2單抗對細(xì)胞因子基因表達(dá)的影響有所不同. 2、一定劑量MPA或CsA均能明顯地抑制T淋巴細(xì)胞增殖,可能與其抑制IL-2、INF-γ表達(dá),增強(qiáng)IL-1

11、0表達(dá)有關(guān),即能改變細(xì)胞因子表達(dá)譜,促使Th1亞群向Th2 亞群偏移可能是其發(fā)揮免疫負(fù)調(diào)節(jié)作用的機(jī)制之一;聯(lián)用抗B7-1單抗有一定協(xié)同效應(yīng). 3、在HCMV感染(滴度為50 TCID<,50>)后,混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)的T淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)明顯地下降;INF-γ的表達(dá)量在感染了HCMV后均有明顯增加. 4、MPA降低了感染HCMV混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)體系的INF-γ蛋白的表達(dá),抗B7-2單抗與其聯(lián)用,則進(jìn)一步降低INF-γ的表達(dá).