抗痘苗病毒基因工程抗體的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、　　首先，我們進行了抗VACVFab噬菌體抗體庫的構(gòu)建。我們先采集具有高滴度VACV抗體的免疫鼠脾，分離淋巴細(xì)胞，然后進行總RNA的提取以及cDNA的合成，接著用一系列特異性的PCR引物通過PCR擴增特異性輕鏈基因和重鏈Fd段基因，在對PCR產(chǎn)物鑒定和純化后，用輕鏈混合物與噬菌粒pComb3構(gòu)建輕鏈庫，隨后隨機挑選克隆進行輕鏈插入率鑒定，在確保輕鏈庫的質(zhì)量后，將重鏈混合物克隆入輕鏈庫中構(gòu)建Fab噬菌體抗體庫，同樣隨機挑選克隆進行重鏈插入

2、率鑒定。最后使用輔助噬菌體對Fab噬菌體抗體庫進行包裝，檢測庫容量，結(jié)果表明我們所構(gòu)建的Fab噬菌體抗體庫的容量為2×107，輕鏈插入率和重鏈插入率分別為100％和90％，足以滿足我們篩庫的需要?！　≡诔晒?gòu)建Fab噬菌體抗體庫的基礎(chǔ)上，我們用純化的VACV病毒對Fab噬菌體抗體庫進行富集，目的是擴大篩選范圍，有效地篩選出特異性抗VACVFab抗體。隨機挑選50個3次富集篩選后的單菌落對其進行了誘導(dǎo)表達，并通過ELISA進行篩選，共獲

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