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1、本文對(duì)番茄中乙烯信號(hào)轉(zhuǎn)錄因子LeERF1和LeERF2調(diào)控機(jī)制進(jìn)行了研究。文章通過RT-PCR方法從破色期番茄果實(shí)中克隆LeERF1和LeERF2基因,PCR產(chǎn)物被亞克隆到原核表達(dá)載體pET-30a上,在大腸桿菌BL21中篩選到含有目的基因的重組質(zhì)粒pET-LeERF1和pET-LeERF2;在大腸桿菌BL21中分別表達(dá)了外源蛋白LeERF1和LeERF2,誘導(dǎo)溫度為37℃,誘導(dǎo)劑IPTG濃度為1mmol/L,誘導(dǎo)時(shí)間為3h;制備了抗L
2、eERF1和LeERF2多克隆抗體;通過膠體金免疫電鏡定位的方法分析番茄果皮維管組織中LeERF1的亞細(xì)胞分布狀況;通過LeERF1蛋白-DNA體外結(jié)合實(shí)驗(yàn),克隆了長度分別為893bp和734bp的TLBP1和TLBP2兩個(gè)基因片斷;采用番茄青霉菌侵染綠熟期、破色期、粉紅期和紅熟期麗春番茄果實(shí)。研究表明,LeERF1隨乙烯釋放量的變化而變化,在蛋白水平受乙烯調(diào)控;LeERF1蛋白與編碼幾丁質(zhì)酶LECHI17基因mRNA水平變化趨勢(shì)基本一
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