狗腸新生物活性肽的分離純化及結(jié)構(gòu)測定.pdf

1、哺乳動物的胃腸道被認(rèn)為是體內(nèi)最大、最重要的內(nèi)分泌器官。對其分泌的胃腸激素的研究已誕生了一門學(xué)科：胃腸內(nèi)分泌學(xué)。隨著蛋白質(zhì)化學(xué)技術(shù)的發(fā)展，對胃腸激素的研究不斷深入。 大多胃腸激素在化學(xué)屬性上屬于多肽類，分子量大多在2kD～5kD范圍，是熱穩(wěn)定性多肽。自1902年bayliss首先發(fā)現(xiàn)胰液素以來，已從中分離純化出許多類型的胃腸肽，這些多肽根據(jù)其功能和一級結(jié)構(gòu)的相似性大致可分為以下幾個族:胰液素/胰高血糖素家族(最大的家族)；膽囊收縮

2、素/胃泌素家族；胰多肽家族；速激肽家族；促生長激素抑制素/cortistatin家族；阿片樣物質(zhì)；胃泌素釋放肽/蛙皮素家族；腸和胰腺中的三葉肽；抗菌肽家族。近些年來,有一些新的胃腸肽被分離,他們不具備這些已知肽的典型序列。 這些肽以復(fù)雜的調(diào)節(jié)方式，對生命現(xiàn)象發(fā)揮重要的作用，與疾病密切相關(guān)。分離純化天然存在的多肽是研究其結(jié)構(gòu)、功能及物理、化學(xué)特性的首要步驟。 本實驗以狗腸作為研究對象，首先用沸水處理狗小腸，然后經(jīng)醋酸提取、

3、海藻酸吸附、鹽酸洗脫、氯化鈉鹽析和乙醇沉淀，再經(jīng)Sephadex G-25（fine）層析和兩次RP-HPLC分離，從中純化出一個熱穩(wěn)定多肽。用Tris-Tricine-SDS-PAGE鑒定其分子量約為4kD。該肽經(jīng)胰酶水解，產(chǎn)物片斷經(jīng)RP-HPLC分離后，取其中的一個主峰對應(yīng)的肽段經(jīng)CapLC-ESI-MS-MS（Q-TOF2）質(zhì)譜儀測定氨基酸順序為：T-E-Y-T-A-L-N-V-L-A-T-T-E-E-N-G。將該段氨基酸序列登錄