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1、登革病毒(dengue virus,DV或DENV)可以感染人類并導(dǎo)致嚴(yán)重的臨床疾病[3],引起的登革出血熱和登革休克綜合征病死率高。因些對(duì)登革病毒感染患者的早期診斷有很重要的意義。登革病毒非結(jié)構(gòu)蛋白NS1具有較強(qiáng)的免疫原性,早期即可出現(xiàn)在感染了登革病毒的患者血清中,且出現(xiàn)時(shí)間早于IgM抗體,有研究表明其可以用于登革熱的早期診斷以及病情監(jiān)測(cè)。因此,NS1有望成為早期診斷登革病毒感染的方法。
本課題研究利用生物信息軟件分析四種血
2、清型登革病毒NS1的抗原表位,選擇四種血清型NS1蛋白中共同保守的抗原表位通過(guò)與小分子載體BSA偶聯(lián),通過(guò)免疫小鼠以及雜交瘤技術(shù)制備獲得四個(gè)型別NS1通用型單克隆抗體23株。同時(shí)根據(jù)Ⅰ-Ⅳ型登革病毒NS1蛋白基因序列設(shè)計(jì)特異性NS1引物,經(jīng)RT-PCR得到四種型別的NS1全基因,并分別克隆到pMD19T載體上,隨后,經(jīng)BamHⅠ和NotⅠ雙酶切將目的片段進(jìn)一步克隆到表達(dá)載體pET30a上,構(gòu)建Ⅰ-Ⅳ型登革病毒NS1蛋白BL-21高效表達(dá)
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