AIV地方分離株（H9N2）HA和NA基因克隆、序列分析及HA的原核表達.pdf_第1頁
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1、東北農(nóng)業(yè)大學碩士學位論文AIV地方分離株（H9N2）HA和NA基因克隆、序列分析及HA的原核表達姓名：唐志芬申請學位級別：碩士專業(yè)：預防獸醫(yī)學指導教師：賈永清王君偉20040601，，，，』耋些奎蘭至莖鶩薹堡堅，一。一!—一，一CLONINGSEQUENCEANALySISANDPROKARYOTICEXPRESSIONOFLOCALISOLATEOFAvIANINFLUENZAHAANDNAGENEAbstractAvianinflu

2、enza(AI)WaScausedbyAtypeavianinfluenzavirus，amemberofOnhomyxoVirdaeAvianinfluenzawithlowvirulenceWaScharacterizedbyrespiratorysymptomandlowproductirityAvianinfluenzaH9N2subtypehaSbeenamainsubtypeinChinasinceitwasreported

3、in1994，whichcaninfectflowandpigandhumanbeingSoitofgreatinteresttostudyAvianinfluenzaH9N2subtypefrommolecularlevelnotonlyintheoryofvirologyandveterinarysciencebutalsoinpublichygieneInthisstudyvlruSoftheloea]isolateA／Chick

4、en／Modanjian∥0823／00(H9N2)(MJ00)WaSpropagatedinSPFchickenembryoandnudeicacidWaSextractedAccordingtotheconservatiresequenceof3’terminusofeightgenefragmentfromAIvapieceofprimerwasdesignedtevelsetranscriptRNAAccordmgtotheeD

5、NAsequenceofHAgeneandNAgenefromH9N2AIVpublbhedinGenBank，twopairsofspecificprimersweredesignedtoamplifyHAgeneandNAgenebysoftwareOli9041andPrimer50andtheproductsofRTPCRwasclonedintopMDl8TvectorThesequencingresultsshowthatc

6、DNAofHAgenehasacompleteopenreadrngframeof1707bpwhichencodes560Aminoacidresiduesindudingsignalpeptideof18aminoacidresiduesandHAlof320aminoacidresiduesandHA2of222aminoacidresiduesBycomparingwith24strainsofthesamesubtypepub

7、lishedinGeneBankthehomologyofnucleotideofHAgeneisbetween815％and99％，andthehomologyofdeducedaminoacidresiduesisbetween87，5％and979％TheaminoacidsequenceofcleavageisRSSRIGLFaccordingwiththelowvirulenceAIVstraineDNAofNAgeneis1

8、448bpinlengthencoding469aminoacidresiduesBycomparingto24strainsofthesamesubtypepublishedinGenBankthehomologyofnucleotidesequenceofNAisbetween825％and989％andthehomologyofdeducedaminoacidresiduesisbetween857％and98％Comparing

9、withHongKongstrainanddomesticstrain，thereisnodeletionofthreeaminoacidresiduesinstackofMJ00NATheHAgenewassubclonedintoprokaryoticexpressionvectorpGEX6p—l，andthepositrverecombinantplasmidwastramsformedintocompetemocellBL21

10、(DE3)pLySThecolonycontainingthepositireplasinidpGEX6PHAWasscreenedandinducedby1mmol／LIPTGandWaSanalyzedbySDSPAGETheresultingelWaS88kufusedwithGST(26ku)，andthetargetproteinis62kuInthisstudyHAgeneandNAgeneofthelocalisolate

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