AIV（H9N2）NS1蛋白單抗的研制及單抗介導(dǎo)ELISA對AIV（H9N2）HA抗原表位變異研究.pdf

1、禽流感病毒(AvianInfluenzaVirus，AIV)的非結(jié)構(gòu)蛋白(NS1)可作為一種區(qū)分野毒感染和滅活疫苗免疫雞群的鑒別診斷標(biāo)記，但不能區(qū)分AIV亞型，具有A型流感特異性。本文利用本河南農(nóng)業(yè)大學(xué)禽病研究所實驗室已構(gòu)建的含有H9N2亞型AIVNS1蛋白基因的重組表達載體陽性菌，在37℃條件下，用終濃度1mmol/L的IPTG誘導(dǎo)表達5h，經(jīng)15％的SDS-PAGE分析，表明NS1基因在大腸桿菌中得到高效表達。用HisTrapHPK

2、it進行復(fù)性和純化，獲得了純度較高、生物活性較好的NS1蛋白。以此NS1蛋白作為抗原免疫Balb/c小鼠，應(yīng)用雜交瘤技術(shù)，通過ELISA篩選，建立了2株抗H9N2亞型AIVNS1單克隆抗體(MonoclonalAntibody，McAb，簡稱單抗)雜交瘤細(xì)胞株6B9和6C2，其分泌單抗抗能力穩(wěn)定。將2株雜交瘤細(xì)胞株分別注射小鼠收獲的腹水單抗效價分別為100×212和100×210。制備的單抗有良好的熱穩(wěn)定性和較高的特異性，只與AIVNS

3、1蛋白反應(yīng)，而與H5N2亞型AIV、H9N2亞型AIV、NDV、IBV、IBDV、ILTV、EDS76V均不發(fā)生反應(yīng)。NS1蛋白單抗的成功研制為利用該單抗開發(fā)一種快速、特異、敏感的鑒別野毒感染禽群和疫苗免疫禽群的方法及進一步研制診斷試紙條或組裝成試劑盒奠定了基礎(chǔ)，也為深入研究NS1蛋白的結(jié)構(gòu)和功能奠定了良好的基礎(chǔ)，對AI的早期診斷、適時監(jiān)控和凈化具有重要現(xiàn)實意義。 目前H9亞型AI仍是我國的流行主型，由于AIV抗原性和致病力的易

4、變異性及不同血清型毒株間缺乏交叉保護性，加大了AI防制的難度。本試驗將本實驗室已建立的4株抗H9N2亞型AIV血凝素(HA)單克隆抗體與保存的1998-2005年間的25株H9N2亞型AIV毒株進行交叉ELISA試驗，發(fā)現(xiàn)不同H9N2亞型AIV毒株血凝素(HA)抗原表位及毒力有明顯差異，可將25株H9N2型AIV毒株分為4類，進一步證實了不同H9N2型AIV毒株HA抗原表位和毒力的變異性和多態(tài)性。其中2株毒株(A3和A18)比較特殊，與