胂酸基乙酸和鋅離子誘導(dǎo)SMMC-7721細(xì)胞凋亡協(xié)同效應(yīng)的初步研究.pdf

1、腫瘤的發(fā)生及其對治療的耐受與細(xì)胞凋亡(Apoptosis,APO)的抑制有密切關(guān)系。細(xì)胞凋亡與壞死相比其所需刺激量小，細(xì)胞膜完整性好所形成的凋亡小體迅速被周圍細(xì)胞吞噬，對機(jī)體影響小。因此，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡已成為腫瘤治療的新模式。胂酸基乙酸(ASAC)是我們合成的一系列砷化物中的一種，體外研究結(jié)果表明其能夠誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡；國內(nèi)外的研究表明，鋅既能誘導(dǎo)細(xì)胞的凋亡，也能抑制其它因素引起的細(xì)胞凋亡，關(guān)鍵是看鋅離子的濃度。 實驗研究目的：

2、 篩選鋅離子的濃度使其能夠增強(qiáng)ASAC誘導(dǎo)人肝癌SMMC-7721細(xì)胞凋亡的作用，同時對正常細(xì)胞VEC的毒性較小，并初步探討其作用的分子機(jī)制。 方法： 培養(yǎng)細(xì)胞用ASAC、乙酸鋅以及ASAC和乙酸鋅聯(lián)合處理不同時間后，MTT法檢測細(xì)胞的增殖變化、瓊脂糖凝膠電泳觀察DNA斷裂的梯形條帶、倒置顯微鏡、透射電鏡檢測細(xì)胞形態(tài)學(xué)的變化及凋亡小體的形成、并用流式細(xì)胞儀進(jìn)一步確證ASAC以及ASAC和乙酸鋅聯(lián)合誘導(dǎo)人肝癌SMMC-7

3、721細(xì)胞凋亡作用、細(xì)胞周期變化以及線粒體膜電位變化。同時采用免疫組化SABC法檢測藥物處理前后Bcl-2基因表達(dá)的變化。 結(jié)果： ASAC可有效地抑制人肝癌SMMC-7721細(xì)胞增殖，隨著藥物濃度增高、時間的延長其抑制作用增強(qiáng)，且細(xì)胞出現(xiàn)典型的凋亡變化。ASAC和Zn2+聯(lián)合對人肝癌細(xì)胞SMMC-7721生長的抑制作用，具有時間依賴性，并不具有濃度依賴性。其中當(dāng)0.1μmol/LASAC和1μmol/lZn2+聯(lián)合作用

4、對人肝癌細(xì)胞SMMC-7721的生長抑制作用最好。DNA瓊脂糖凝膠電泳出現(xiàn)凋亡特征性梯形條帶。透射電鏡下可見細(xì)胞核仁消失、碎裂，胞內(nèi)空泡增多，染色質(zhì)濃縮聚集。流式細(xì)胞儀檢測出現(xiàn)典型的凋亡峰，ASAC作用組隨著時間的延長和劑量的增加，凋亡指數(shù)在不斷增加，并且將細(xì)胞阻滯在G2/M期；當(dāng)0.1μmol/lASAC和1μmol/l的Zn2+聯(lián)合作用后，細(xì)胞的凋亡指數(shù)最大，與對照組相比將細(xì)胞周期阻滯在S期。SABC免疫組化實驗表明：Bcl-2基因

5、表達(dá)隨時間的延長逐漸下調(diào)。流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果表明：線粒體膜電位隨0.1μmol/lASAC和1μmol/l的Zn2+聯(lián)合作用時間的延長逐漸降低。 結(jié)論： 1)0.1μmol/lASAC在體外可明顯抑制人肝癌細(xì)胞SMMC-7721增殖，并可誘導(dǎo)該細(xì)胞凋亡，該雙重效應(yīng)呈濃度和作用時間依賴性；0.1μmol/lASAC和1μmol/lZn2+聯(lián)合作用在體外可明顯抑制人肝癌細(xì)胞SMMC-7721增殖，并可誘導(dǎo)該細(xì)胞凋亡，與0.1