27302.仙客來(lái)體細(xì)胞胚胎發(fā)生、發(fā)育及serk基因在體細(xì)胞胚性轉(zhuǎn)化過(guò)程的表達(dá)特性

1、中國(guó)海洋大學(xué)博士學(xué)位論文仙客來(lái)體細(xì)胞胚胎發(fā)生、發(fā)育及SERK基因在體細(xì)胞胚性轉(zhuǎn)化過(guò)程的表達(dá)特性姓名：由翠榮申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：細(xì)胞生物學(xué)指導(dǎo)教師：樊廷俊20090601結(jié)果表明，胚性和非胚性愈傷組織中均含有不同大小的細(xì)胞和細(xì)胞團(tuán)。兩種胚性愈傷組織細(xì)胞中均含有胚性細(xì)胞和非胚性細(xì)胞，但數(shù)量上存在明顯的差異。松軟胚性愈傷組織多為含有數(shù)十個(gè)胚性細(xì)胞的胚性細(xì)胞團(tuán)，而松脆胚性愈傷組織中的胚性細(xì)胞團(tuán)胚性細(xì)胞數(shù)目只有幾個(gè)或十幾個(gè)，且在隨機(jī)選取的相同

2、視野中胚性細(xì)胞團(tuán)的數(shù)量前者明顯多于后者。通過(guò)連續(xù)的活體細(xì)胞追蹤觀察發(fā)現(xiàn)，胚性細(xì)胞團(tuán)起源于胚性母細(xì)胞。一個(gè)胚性母細(xì)胞通過(guò)持續(xù)分裂形成包含有幾個(gè)或十幾個(gè)胚性細(xì)胞的胚性細(xì)胞團(tuán)，而包含有幾十個(gè)胚性細(xì)胞的胚性細(xì)胞團(tuán)來(lái)源于成團(tuán)存在的幾個(gè)胚性母細(xì)胞。對(duì)體細(xì)胞胚胎發(fā)生和發(fā)育整個(gè)過(guò)程進(jìn)行了細(xì)胞和組織學(xué)追蹤，結(jié)合活體細(xì)胞和石蠟包埋切片技術(shù)顯微觀察結(jié)果表明，該培養(yǎng)體系的體細(xì)胞胚胎屬于單細(xì)胞發(fā)生體系。體細(xì)胞胚的發(fā)生起源于胚性細(xì)胞團(tuán)表面的單個(gè)胚性細(xì)胞，經(jīng)歷了二分

3、體、四分體、八分體、多細(xì)胞原胚、球形胚、心形胚和魚(yú)雷胚等時(shí)期，發(fā)育成完整植株。仙客來(lái)體細(xì)胞胚發(fā)育植株再生方式有兩種：第一種為胚性細(xì)胞經(jīng)多細(xì)胞原胚、球形胚、心形胚和魚(yú)雷胚再生為小植株；第二種再生方式為球形胚不經(jīng)過(guò)魚(yú)雷胚而發(fā)育先形成球莖，然后是根或芽的形成，最后形成一完整植株。利用組織化學(xué)切片技術(shù)對(duì)體細(xì)胞胚發(fā)生和發(fā)育過(guò)程中淀粉的代謝進(jìn)行了動(dòng)態(tài)跟蹤觀察。結(jié)果顯示在體細(xì)胞胚胎整個(gè)發(fā)生發(fā)育期內(nèi)出現(xiàn)了4個(gè)淀粉粒積累的高峰期，分別為胚性細(xì)胞期、球形胚

4、期、早期魚(yú)雷胚期和體細(xì)胞胚再生為小植株的球莖和不定芽的發(fā)育期，淀粉的積累和消減與體細(xì)胞胚的發(fā)生、發(fā)育密切相關(guān)。為進(jìn)一步研究高頻率體胚體系，以再生胚胎為外植體，采用上述的胚性愈傷組織繼代培養(yǎng)基I／2MS2，4D2mgLq6一BA02mgL1和I／2MS2，4D2mgL12iP02mgL_使其重新脫分化，初培養(yǎng)25—28d即成功誘導(dǎo)獲得了胚性愈傷組織。在無(wú)激素的基本培養(yǎng)基上促使體細(xì)胞胚的發(fā)育，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，除小球形胚外，以不同再生胚胎為外植