桃體細(xì)胞胚發(fā)生相關(guān)基因SERK2的克隆與表達(dá)分析.pdf

1、桃樹(shù)是中國(guó)重要的落葉果樹(shù)之一，傳統(tǒng)桃的育種工作由于受工作量大、周期長(zhǎng)等因素影響，從而導(dǎo)致育種工作進(jìn)程緩慢?，F(xiàn)代分子生物技術(shù)的快速發(fā)展，尤其是植物組織培養(yǎng)和基因工程的發(fā)展，為桃定向改良和新品種選育提供了重要的技術(shù)支持。體細(xì)胞胚發(fā)生在植物再生中是一條重要途徑，而且它也是研究植物胚胎發(fā)育和遺傳轉(zhuǎn)化的良好受體。研究者們通過(guò)分析植物體細(xì)胞胚發(fā)生過(guò)程中的基因表達(dá)或在胚性組織和非胚性組織中基因的差異表達(dá)，獲得了在體細(xì)胞胚發(fā)生過(guò)程不同時(shí)期表達(dá)的基因，并

2、分析了這些基因在胚胎發(fā)生途徑中可能的作用?；诖耍狙芯繌摹锾稹抑蟹蛛x得到SERK2基因CDS序列，研究SERK2基因在桃不同組織和器官中及在不同狀態(tài)愈傷組織中的表達(dá)情況，分析SERK2基因的表達(dá)與體胚發(fā)生能力等的關(guān)系;構(gòu)建PpeSERK2基因超量表達(dá)載體并轉(zhuǎn)化擬南芥進(jìn)行驗(yàn)證基因功能。主要研究結(jié)果如下:
　　(1)PpeSERK2基因克隆:利用RT-PCR方法，從‘秋甜’不同組織（器官）和胚培苗葉片的cDNA中克隆獲得了Ppe

3、SERK2基因。PpeSERK2基因CDS全長(zhǎng)1881bp，編碼626個(gè)氨基酸。
　　(2)PpeSERK2基因在‘秋甜’桃不同器官表達(dá)分析:利用qRT-PCR檢測(cè)分析PpeSERK2基因在桃不同器官的表達(dá)量，結(jié)果顯示PpeSERK2在‘秋甜’須根、莖（莖尖、莖基）、葉（老葉、嫩葉）、果實(shí)和胚中均有表達(dá)。其中PpeSERK2在莖基和莖尖相對(duì)表達(dá)量最高、其次是嫩葉和果肉，胚、須根和老葉三者的表達(dá)較低，其中老葉表達(dá)量最低。
　　

4、(3)PpeSERK2基因在‘秋甜’不同狀態(tài)愈傷組織中的表達(dá)分析:結(jié)果顯示PpeSERK2在‘秋甜’白色愈傷組織的表達(dá)量最高，并且顯著高于在黃綠、黃白、褐化和綠色愈傷組織中的表達(dá)水平。此外，PpeSERK2基因在綠色和黃綠色的愈傷組織中幾乎不表達(dá)。
　　(4)超量載體構(gòu)建及PpeSERK2基因功能驗(yàn)證:成功構(gòu)建了35S:.PpeSERK2過(guò)量表達(dá)載體，通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)方法轉(zhuǎn)化擬南芥并預(yù)想獲得轉(zhuǎn)基因植株。后續(xù)PpeSERK2基因功能驗(yàn)