棉花體細(xì)胞胚胎發(fā)生的調(diào)控及其抗病蟲基因的遺傳轉(zhuǎn)化.pdf

1、該研究內(nèi)容主要涉及棉花體細(xì)胞胚胎發(fā)生的調(diào)控,高效棉花遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立;轉(zhuǎn)化獲得雙抗蟲基因和雙抗病基因的棉花;同時(shí)對(duì)轉(zhuǎn)基因引起的棉花性狀變異的規(guī)律進(jìn)行初步研究,為轉(zhuǎn)基因棉花育種提供理論指導(dǎo).取得的主要研究結(jié)果如下:1 IBA的濃度對(duì)棉花愈傷組織的誘導(dǎo)和體細(xì)胞胚胎分化起著至關(guān)重要的作用,在和KT配合使用下能使珂字201品種的愈傷組織的胚胎分化率提高到89.5﹪;實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明誘導(dǎo)棉花愈傷組織和體細(xì)胞胚胎分化的最優(yōu)化激素配比分別為:IBA1.

2、0mg/L+KT0.5mg/L和IBA0.5mg/L+KT0.3mg/L.2 在誘導(dǎo)愈傷組織培養(yǎng)基中補(bǔ)加120mg/L硫酸鎂,珂字201愈傷組織的誘導(dǎo)量和愈傷組織的生長受到抑制,但是改良了愈傷組織的質(zhì)量,加速向胚性愈傷組織轉(zhuǎn)化.3 在上述的基礎(chǔ)上建立棉花體細(xì)胞胚胎發(fā)生的植株再生體系,利用該體系使許多再生頑拗的品種成功獲得體細(xì)胞胚胎發(fā)生和植株再生.4 棉花組織培養(yǎng)和體細(xì)胞胚胎發(fā)生的整個(gè)過程存在著兩次不同程度的愈傷組織褐化,其內(nèi)在的原因可能

3、是愈傷組織發(fā)生了細(xì)胞程序性死亡.5 預(yù)培養(yǎng)12天的棉花胚性愈傷組織是較好遺傳轉(zhuǎn)化材料,對(duì)轉(zhuǎn)化的影響因子進(jìn)行比較實(shí)驗(yàn).6 利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)棉花胚性愈傷組織把雙抗蟲基因,CrylAc和API-B,轉(zhuǎn)入珂字201棉花品種中,經(jīng)卡那霉素涂抹、PCR擴(kuò)增、Southern雜交和葉片離體喂蟲證實(shí),所獲得轉(zhuǎn)雙抗蟲基因棉花的抗蟲性達(dá)到92.8﹪-98.7﹪,比對(duì)照DR98-2(僅CrylAc基因)的抗蟲性顯著.7 利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)棉花胚性愈傷組織把雙抗病基

4、因--幾丁質(zhì)酶基因和葡聚糖酶基因轉(zhuǎn)入冀合321棉花品種中,經(jīng)卡那霉素涂抹、PCR擴(kuò)增、Southern雜交、苗期鑒定和大田調(diào)查證實(shí),所獲得轉(zhuǎn)雙抗病基因棉花的部分株系為高抗黃萎病,病情指數(shù)為6.5-9.5,比對(duì)照冀合321(52.4)的抗病性顯著.8 建立的棉花胚性愈傷組織作外植體的農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化體系.9 棉花轉(zhuǎn)基因后代存在著大量的體細(xì)胞克隆變異,幾乎涉及到各個(gè)農(nóng)藝性狀;對(duì)500個(gè)轉(zhuǎn)基因變異群體進(jìn)行初步的研究表明,農(nóng)藝性狀的變異有一定的規(guī)律性