棉花體細胞胚胎發(fā)生的調(diào)控及其抗病蟲基因的遺傳轉化.pdf

1、該研究內(nèi)容主要涉及棉花體細胞胚胎發(fā)生的調(diào)控,高效棉花遺傳轉化體系的建立;轉化獲得雙抗蟲基因和雙抗病基因的棉花;同時對轉基因引起的棉花性狀變異的規(guī)律進行初步研究,為轉基因棉花育種提供理論指導.取得的主要研究結果如下:1 IBA的濃度對棉花愈傷組織的誘導和體細胞胚胎分化起著至關重要的作用,在和KT配合使用下能使珂字201品種的愈傷組織的胚胎分化率提高到89.5﹪;實驗結果表明誘導棉花愈傷組織和體細胞胚胎分化的最優(yōu)化激素配比分別為:IBA1.

2、0mg/L+KT0.5mg/L和IBA0.5mg/L+KT0.3mg/L.2 在誘導愈傷組織培養(yǎng)基中補加120mg/L硫酸鎂,珂字201愈傷組織的誘導量和愈傷組織的生長受到抑制,但是改良了愈傷組織的質(zhì)量,加速向胚性愈傷組織轉化.3 在上述的基礎上建立棉花體細胞胚胎發(fā)生的植株再生體系,利用該體系使許多再生頑拗的品種成功獲得體細胞胚胎發(fā)生和植株再生.4 棉花組織培養(yǎng)和體細胞胚胎發(fā)生的整個過程存在著兩次不同程度的愈傷組織褐化,其內(nèi)在的原因可能

3、是愈傷組織發(fā)生了細胞程序性死亡.5 預培養(yǎng)12天的棉花胚性愈傷組織是較好遺傳轉化材料,對轉化的影響因子進行比較實驗.6 利用農(nóng)桿菌介導棉花胚性愈傷組織把雙抗蟲基因,CrylAc和API-B,轉入珂字201棉花品種中,經(jīng)卡那霉素涂抹、PCR擴增、Southern雜交和葉片離體喂蟲證實,所獲得轉雙抗蟲基因棉花的抗蟲性達到92.8﹪-98.7﹪,比對照DR98-2(僅CrylAc基因)的抗蟲性顯著.7 利用農(nóng)桿菌介導棉花胚性愈傷組織把雙抗病基

4、因--幾丁質(zhì)酶基因和葡聚糖酶基因轉入冀合321棉花品種中,經(jīng)卡那霉素涂抹、PCR擴增、Southern雜交、苗期鑒定和大田調(diào)查證實,所獲得轉雙抗病基因棉花的部分株系為高抗黃萎病,病情指數(shù)為6.5-9.5,比對照冀合321(52.4)的抗病性顯著.8 建立的棉花胚性愈傷組織作外植體的農(nóng)桿菌轉化體系.9 棉花轉基因后代存在著大量的體細胞克隆變異,幾乎涉及到各個農(nóng)藝性狀;對500個轉基因變異群體進行初步的研究表明,農(nóng)藝性狀的變異有一定的規(guī)律性