水稻再生體系建立與反義蠟質基因導入及檢測的研究.pdf

1、萊陽農學院碩士學位論文水稻再生體系建立與反義蠟質基因導入及檢測的研究姓名：賀紅申請學位級別：碩士專業(yè)：作物耕作學與栽培學指導教師：石巖李曉方20040501培養(yǎng)基為：MS05mg／LNAA15mg／LKT2mg／L6BA10panol／LCuS04，分化率分別達87％和40％。AgN03單因子實驗表明：Ag不但能促進愈傷組織的分化，而且有助于減少玻璃苗的產生，但是分化苗中畸形苗較多。Ag濃度為59mol／L時，愈傷組織分化率最高，粵香占

2、為30％，軟香ih為375％。在根癌農桿菌介導秈稻基因轉化中，農桿菌菌株為EHAl05，表達載體為p13WG。不同基因型愈傷組織有不同適宜濃度的超霉素選擇壓，本研究中的粵香占和軟香占對超霉素比較敏感，適宜的選擇壓分別為10mg／L、15mg／L；經穩(wěn)定表達率和GUS瞬時表達率測定表明：EHAl05菌株的OD600為O5左右時，侵染愈傷組織的能力最強，通過篩選可獲得較高的抗性愈傷數(shù)，粵香占為178％，軟香占為126％，且共培養(yǎng)3天比較適宜

3、；愈傷組織在活化的農桿菌中浸泡10rain左右最適宜，抗性愈傷組織獲得率最高，粵香占為178％和軟香占163％；在共培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)基中添加1001LLmol／L的乙酰丁香酮(AS)抗性愈傷數(shù)獲得率最高，粵香占為175％，軟香占為111％；在重懸液侵染愈傷組織之前2小時添加乙酰丁香酮(AS)，抗性愈傷組織的穩(wěn)定表達率最高，粵香占為223％和軟香占為132％；共培養(yǎng)基中添加209／L的葡萄糖有利于提高愈傷組織的GUS瞬時表達率，粵香占和軟