苦瓜離體再生體系的建立及開花相關基因的研究.pdf

1、四川大學博士學位論文苦瓜離體再生體系的建立及開花相關基因的研究姓名：楊滿業(yè)申請學位級別：博士專業(yè)：植物學指導教師：陳放20030401四川大學博士學位論文2苦瓜外植體所形成的愈傷組織從形態(tài)學上可分為三種不同的類型：綠色愈傷組織；黃綠色愈傷組織和黃色的愈傷組織。在愈傷組織分化形成不定芽的過程中，植物激素的種類，用量及所用愈傷組織的類型非常重要。綠色愈傷組織和黃綠色愈傷組織在培養(yǎng)基(MS6BAKT)上成功地誘導分化出不定芽，最高分化頻率是6

2、67％；黃色愈傷組織目p使在適宜條件下也不能分化出不定芽。3篩選出培養(yǎng)基(MSzT50mgl一KT05mgl。1)較為適合芽的增殖。增殖系數為56，且幼芽的基部產生較少的愈傷組織。4，培養(yǎng)基1／2MSZT002mgll或1／2MS有助于幼芽離體生根，這兩種培養(yǎng)基既有利于幼芽長出新根，又不至于在幼芽基部產生太多的愈傷組織，影響試管苗的移栽成活率，是苦瓜幼芽離體生根較為適合的培養(yǎng)基。5試管苗經大田移栽試驗，成活率約為70O％，其性狀與種子苗

3、無明顯差異。6采用RTPCR和5’末端快速擴增法成功地克隆了苦瓜開花相關基因尉￡cDNA全長1001個堿基，包含一個完整的，編碼228個氨基酸的開放讀碼框(OpenReadingFrame)。5’末端非翻譯區(qū)由50個堿基組成。3’末端非翻譯區(qū)含267個堿基，其中包括由22個堿基組成的ploy(A)尾巴及位于833bp處的ploy(A)加尾信號(AATAAA)。GenBank登錄號為：AYl78837。BAG基因是啪Sbox基因，含有完整

4、的MADS—box(氨基酸序號158)和K—box(氨基酸序號88—193)，與多種植物的MADSbox蛋白具有很高的同源性。與黃瓜(Cucumissativus)MADS咱oxproteinCUMl0的同源性為95％，與棉花(GossipierMrsutum)MADSboxprotein甾劂DE2的同源性為84％，與擬南芥(Arabidopsisthaliana)MADSboxproteinAGLll的同源性為72％：同典型的凇DS—

5、box基因AP3、AGR80、彪剛、MCMl、SRF的MADSbox區(qū)域分別有46、38、44、45、34個氨基酸殘基相同。同源性分別為80％、66％、78％、78％、59％。Southern雜交分析標明，BAG基因在苦瓜基因組中有2或3個拷貝，屬于低拷貝數的基因。Northern雜交和RT—PcR檢測證實，BAG基因在苦瓜花的雄蕊、心皮中大量表達，雜交信號強烈，在其它的組織、器官中沒有明顯的雜交信號。其中心皮的表達量最為豐富。這種表達