30663.小類泛素化修飾過程中主要酶蛋白的表達純化和抗體制備_第1頁
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1、南開大學碩士學位論文小類泛素化修飾過程中主要酶蛋白的表達純化和抗體制備姓名：王遠根申請學位級別：碩士專業(yè)：生物化學與分子生物學指導教師：王穎20090601AbstractAbstractSmallubiquitin—likemodifier(SUMO)isarecentlydiscoveredmemberofubiquitinlikeproteinsthatiscovalentlyaaachedtotargetproteinsasap

2、ost—translationalmodificationtoalterthelocalization，stabilityand／orfunctionofthetargetproteinsSUMOylationisareversibleprocess，whichiscatalyzedbyseveralenzymesincludingSUMOactivatingenzyme(SAE，E1)，SUMOconjugationenzyme(SC

3、E，E2)andSUMOligase(E3)TostudytheexpressionofSAEandSCE，andtheregulationofSUMOylationinthisthesis，polyclonalantibodiesagainstthetwosubunitsofSAE(AOS1andUBA2)，aswellastheSCE(UBC9)weregeneratedandevaluatedTheplasmidpET28ahUB

4、A2(S1andpET28a—hUBC9weretransformedintoEcoliBL21(DE3)pET28ahUBA2(S)expressesUBA2’SN—terminal1246aminoacidsOptimumconditionsfortheexpressionofUBA2(S)andUBC9werefoundTheUBA2(S)WasinducedwithO1mrnol／LIPTGat37℃for4h；andtheUB

5、C9wasinducedwith005mmol／LIPTGat37℃for4hUBa2(S)andUBC9werepurifiedwithaffinitychromatographyunderdenatureandnativeconditions，respectivelyPolyclonalantibodiesweregeneratedinrabbitsagainstUBA2(S)，UBC9，andAOS1whichwaspurifie

6、dpreviouslyTheresultsofWesternBlotsshowedthatthesepolyclonalantibodiescanrecognizetheirantigenspecificallyandeffectivelyTheanti—UBA2(S)antibodycanrecognizethefull—lengthUBA2MoreoverendogenousAOSI，UBA2andUBC9in293TcellsCa

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