小類泛素修飾蛋白的表達純化和抗體制備.pdf

1、小類泛素修飾蛋白(small ubiquitin-like modifier, SUMO)是近年發(fā)現(xiàn)的類泛素修飾蛋白,可通過異肽鍵共價連接到靶蛋白上,影響靶蛋白的生物學功能如細胞內(nèi)定位、穩(wěn)定性及與其它生物大分子的相互作用。在人中發(fā)現(xiàn)了四個SUMO亞型,分別是SUMO-1、SUMO-2、SUMO-3、SUMO-4,其中SUMO-2/3的活性形式具有97％的同源性。為了研究人的SUMO化修飾對蛋白質(zhì)功能的影響,本文分別對人的SUMO-1、S

2、UMO-2和SUMO-4進行了表達純化并制備其多克隆抗體,主要研究結(jié)果如下： 本實驗用pET28a(+)作為載體構(gòu)建了人SUMO4的原核表達質(zhì)粒pET28a-hSUMO4。利用本室保存的pET28a-hSUMO1、pET28a-hSUMO2和本文構(gòu)建的pET28a-hSUMO4分別轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3),優(yōu)化了表達重組SUMO-1、SUMO-2、SUMO-4的誘導條件。SUMO-1和SUMO-2誘導條件相同：IPTG濃度

3、為0.1 mmol/L,于37℃誘導4 h。SUMO-4誘導IPTG濃度為0.5mmol/L,于37℃誘導8 h。在此基礎(chǔ)上,誘導表達了人重組SUMO-1,SUMO-2和SUMO-4蛋白,利用不同的純化方法得到高純度的變性和非變性的人重組SUMO-1,SUMO-2和SUMO-4蛋白。 以純化的變性和非變性人重組SUMO-1、SUMO-2和SUMO-4蛋白為抗原免疫新西蘭兔。利用ELISA法測定抗血清效價,所制備的抗體在稀釋100