大腸桿菌不耐熱腸毒素對(duì)新城疫疫苗的免疫增強(qiáng)作用研究.pdf

1、該實(shí)驗(yàn)利用該課題組構(gòu)建的表達(dá)LT突變體基因的質(zhì)粒pLTR72(質(zhì)粒的LT基因中編碼第72位丙氨酸的密碼子GCA被替換成為編碼精氨酸的密碼子AGA)和天然LT質(zhì)粒pLT分別轉(zhuǎn)化大腸桿菌JM101,接種于LB培養(yǎng)基中培養(yǎng),然后裂解菌體,純化蛋白LTR72和LT,用間接ELISA法檢測(cè)目的蛋白的表達(dá)情況.結(jié)果表明,LB培養(yǎng)基可以表達(dá)質(zhì)粒pLTR72和質(zhì)粒pLT中的LT突變體基因及LT基因,并可將產(chǎn)物分泌到大腸桿菌胞質(zhì)中,成為具有GM1結(jié)合活性

2、的突變體LT和天然LT,而且二者在活性上無(wú)差異;將純化蛋白LT和LTR72進(jìn)行SDS-PAGE電泳,結(jié)果顯示,純化的突變體LT蛋白和天然LT蛋白的結(jié)構(gòu)相似,都是由A、B二亞單位組成;在兔腸袢結(jié)扎試驗(yàn)中,天然LT的毒性最大,突變體LT72的毒性很小,接近于陰性對(duì)照的水平.將不同劑量的單純LTR72接種于1日齡健康雛雞,結(jié)果顯示,接種100 μ g范圍內(nèi)對(duì)雞安全可靠,無(wú)不良反應(yīng),單純LTR72免疫后對(duì)ND HI抗體效價(jià)無(wú)影響,但能非特異性地

3、刺激雞體內(nèi)淋巴細(xì)胞活性增強(qiáng).通過(guò)用不同劑量LTR72協(xié)同疫苗免疫后檢測(cè)ND抗體的水平,確定疫苗中LTR72的最佳用量為25 μ g.將LTR72與ND La Sota疫苗混合后進(jìn)行雛雞免疫試驗(yàn),結(jié)果表明,無(wú)論是高母源抗體免疫組,還是低母源抗體免疫組,LTR72-ND疫苗組的HI抗體效價(jià)均明顯高于單純疫苗組(P<0.05);在高母源抗體時(shí),LTR72-ND疫苗組的有效免疫期比單純疫苗組延長(zhǎng)1周,在低母源抗體時(shí)延長(zhǎng)了2周.這些結(jié)果充分說(shuō)明,