家蠶接種BmNPV后體內(nèi)兩種代謝酶活性變化及家蠶血淋巴金屬蛋白的初步分離檢測(cè).pdf

1、家蠶也稱桑蠶，是一種重要的經(jīng)濟(jì)昆蟲，同時(shí)也是研究鱗翅目昆蟲的重要模式生物。由BmNPV侵染引起的家蠶核型多角體病毒病，給蠶業(yè)生產(chǎn)造成巨大的危害和經(jīng)濟(jì)損失。病毒入侵會(huì)影響家蠶正常的生理代謝，尤其會(huì)引起體內(nèi)多種酶活性發(fā)生變化，有研究發(fā)現(xiàn)家蠶體內(nèi)羧酸酯酶和乙酰膽堿酯酶活性可能與家蠶的抗性有關(guān)，但其活性變化規(guī)律尚不明確。金屬元素存在于家蠶體內(nèi)，并伴隨家蠶生長發(fā)育的各個(gè)階段，金屬元素是家蠶體內(nèi)重要的組成部分，一般來說，生物體內(nèi)的金屬元素按含量的多

2、少主要分為宏量元素和微量元素，大部分的金屬元素通過與蛋白結(jié)合來參與各項(xiàng)生命活動(dòng)。因此為了深入研究家蠶體內(nèi)金屬蛋白的結(jié)構(gòu)和功能，對(duì)金屬蛋白的分離與檢測(cè)是必不可少的。本文選擇對(duì)BmNPV具有抗性的家蠶品種及其非抗性非抗性品種作為試驗(yàn)材料，在5齡期對(duì)其添食BmNPV病毒，同時(shí)設(shè)不添食病毒的正常飼養(yǎng)組，通過測(cè)定添食病毒后血淋巴和中腸組織中羧酸酯酶和乙酰膽堿酯酶的活性探討了其活性變化規(guī)律，采用電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）法測(cè)定了家蠶血淋巴

3、中11種金屬的含量，并建立了體積排阻-高效液相色譜（SEC-HPLC）與電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）聯(lián)用技術(shù)用于家蠶金屬蛋白的分離檢測(cè)。本文的研究結(jié)果如下：
　　1.選取具有 BmNPV抗性的家蠶品種及其非抗性非抗性品種，在五齡期添食BmNPV病毒，同時(shí)設(shè)不添食病毒的正常飼養(yǎng)組，而后連續(xù)5天取血液和中腸組織，測(cè)定其中羧酸酯酶和乙酰膽堿酯酶的活性，探討了抗性品種及其非抗性非抗性品種家蠶接種BmNPV后體內(nèi)羧酸酯酶（CarE）

4、和乙酰膽堿酯酶（AchE）活性的變化規(guī)律。結(jié)果表明，抗性品種在感染BmNPV病毒后其中腸中羧酸酯酶活性高于未感染的抗性品種，表明抗性品種對(duì)感染病毒做出了有效的應(yīng)答和防御；而在感染病毒后抗性品種的中腸與血淋巴中乙酰膽堿酯酶活性變化相對(duì)較小。據(jù)此推測(cè)，抗性品種在感染病毒后仍保持了相對(duì)穩(wěn)定的代謝過程。
　　2.建立了用電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）法測(cè)定家蠶血淋巴中Na、Mg、K、Ca、Mn、Co、Ni、Cu、Fe、Zn、Rb等1

5、1種金屬元素的分析方法。測(cè)定四組家蠶（正?？剐云贩N、添食病毒抗性品種，正常非抗性品種、添食病毒非抗性品種）結(jié)果發(fā)現(xiàn)，Na、Mg、K、Ca含量較高，達(dá)到μg/mL級(jí)別，其余元素Mn、Co、Ni、Cu、Fe、Zn和Rb含量較低，在μg/L級(jí)別，其中Co含量在1μg/L左右?？剐云贩N和非抗性品種同一種元素的含量在5天的變化趨勢(shì)基本一致，抗性品種Mn、Fe、K、Ca、Mg元素的含量在前四天均高于非抗性品種，非抗性品種中 Cu元素的含量在后三天高

6、于抗性品種。接種BmNPV病毒后抗性品種和非抗性品種金屬含量均發(fā)生變化，對(duì)于大多數(shù)金屬而言，抗性品種和非抗性品種變化一致，推測(cè)可能是BmNPV病毒的浸染引起的，Cu、Mn、Ni元素在第2天和第4天的變化趨勢(shì)有所不同，Rb元素在第5天出現(xiàn)不同，推測(cè)可能與抗性有關(guān)。
　　3.實(shí)驗(yàn)中，我們采用SEC-HPLC技術(shù)對(duì)四組家蠶（BmNPV抗性品種、添食病毒的BmNPV抗性品種，非抗性的品種、添食病毒的非抗性的品種）血液中的金屬蛋白進(jìn)行了分離

7、（流動(dòng)相為30 mmol/L的Tris-醋酸緩沖液，pH7.4，進(jìn)樣量50μL，流速0.7 mL/min），然后與ICP-MS技術(shù)聯(lián)用，對(duì)家蠶血液內(nèi)金屬蛋白中的金屬元素進(jìn)行了檢測(cè)。測(cè)定表明，家蠶血淋巴中蛋白的出峰時(shí)間在8 min~22 min之間。Cu、Fe與大分子量及小分子量的蛋白均有結(jié)合，大部分的Zn、Co與出峰時(shí)間在12min~20min的蛋白結(jié)合，Ni主要與出峰時(shí)間在15min~20min的蛋白結(jié)合，Rb與大部分的Mg、Ca、M