RNAi轉(zhuǎn)基因家蠶抑制BmNPV的抗性研究.pdf

1、已有研究表明利用RNAi技術(shù)通過干擾BmNPV復(fù)制的必需基因ie-1、lef-1和gp64,可以有效抑制BmNPV的增殖。然而,由于選擇干擾的靶基因不同,抑制病毒復(fù)制的效率相差甚遠(yuǎn),即時對于同一個基因,針對不同區(qū)域的siRNA其效率也有很大差異。為了探討表達(dá)不同dsRNA的轉(zhuǎn)基因家蠶對BmNPV的抗性,將已構(gòu)建的帶有短,lef-1 dsRNA表達(dá)盒的轉(zhuǎn)基因載體pigA3-LEF-Neo,通過精子介導(dǎo)法導(dǎo)入家蠶(皓月)體內(nèi),通過GFP熒光

2、和G418抗性雙重篩選,結(jié)合PCR、點(diǎn)雜交等分子生物學(xué)鑒定獲得了轉(zhuǎn)基因家蠶。對G6代2齡轉(zhuǎn)基因家蠶接種BmNPV,結(jié)果顯示轉(zhuǎn)基因家蠶的死亡率比對照組下降了10％-30％,表明轉(zhuǎn)基因家蠶對BmNPV的抗性有所提高；對接種BmNPV的5齡轉(zhuǎn)基因家蠶的定量PCR檢測結(jié)果顯示轉(zhuǎn)基因家蠶體內(nèi)的lef-1 mRNA水平比對照組平均降低了72倍和26.5倍,最高下降了104倍,進(jìn)一步表明表達(dá)lef-1 dsRNA的轉(zhuǎn)基因家蠶抑制了BmNPV lef-

3、1基因的表達(dá)。
　　 同時,為了研究不同品系轉(zhuǎn)基因家蠶對BmNPV的抗性,將帶有長ie-1 dsRNA表達(dá)盒的轉(zhuǎn)基因載體pigA3-IE-Neo通過精子介導(dǎo)法導(dǎo)入家蠶(菁松)體內(nèi),對G1代研究結(jié)果表明抑制BmNPV的增殖。
　　 另外,我們還對菁松、皓月、蘇菊(A、B系)、明虎(A、B系)和高白×皓月的這五種品系的二齡起蠶進(jìn)行攻毒實(shí)驗(yàn),同時與上述兩種轉(zhuǎn)基因家蠶進(jìn)行抗性比較。研究結(jié)果表明不同品種的家蠶對病毒的抗性存在差異,