RNAi轉基因家蠶抑制BmNPV的抗性研究.pdf

1、已有研究表明利用RNAi技術通過干擾BmNPV復制的必需基因ie-1、lef-1和gp64,可以有效抑制BmNPV的增殖。然而,由于選擇干擾的靶基因不同,抑制病毒復制的效率相差甚遠,即時對于同一個基因,針對不同區(qū)域的siRNA其效率也有很大差異。為了探討表達不同dsRNA的轉基因家蠶對BmNPV的抗性,將已構建的帶有短,lef-1 dsRNA表達盒的轉基因載體pigA3-LEF-Neo,通過精子介導法導入家蠶(皓月)體內,通過GFP熒光

2、和G418抗性雙重篩選,結合PCR、點雜交等分子生物學鑒定獲得了轉基因家蠶。對G6代2齡轉基因家蠶接種BmNPV,結果顯示轉基因家蠶的死亡率比對照組下降了10％-30％,表明轉基因家蠶對BmNPV的抗性有所提高；對接種BmNPV的5齡轉基因家蠶的定量PCR檢測結果顯示轉基因家蠶體內的lef-1 mRNA水平比對照組平均降低了72倍和26.5倍,最高下降了104倍,進一步表明表達lef-1 dsRNA的轉基因家蠶抑制了BmNPV lef-

3、1基因的表達。
　　 同時,為了研究不同品系轉基因家蠶對BmNPV的抗性,將帶有長ie-1 dsRNA表達盒的轉基因載體pigA3-IE-Neo通過精子介導法導入家蠶(菁松)體內,對G1代研究結果表明抑制BmNPV的增殖。
　　 另外,我們還對菁松、皓月、蘇菊(A、B系)、明虎(A、B系)和高白×皓月的這五種品系的二齡起蠶進行攻毒實驗,同時與上述兩種轉基因家蠶進行抗性比較。研究結果表明不同品種的家蠶對病毒的抗性存在差異,