西瓜Rab18、BURP domain-containing protein17基因的克隆、序列分析及表達研究.pdf

1、分類號：密級：UDC：編號：2012210145碩士學位論文西瓜西瓜Rab18、BURPdomaincontainingprotein17基因的克隆、序列分析及表達基因的克隆、序列分析及表達研究研究Molecularcloning、sequenceacterizationexpressionpatternofRab18、BURPdomaincontainingprotein17genefromCitrulluslanatus碩士研究碩士

2、研究生：生：肖鑫麗肖鑫麗指導教師：彭磊彭磊副教授教授申請學位類申請學位類別：農學碩士農學碩士專業(yè)：果樹果樹學培養(yǎng)學院：園林園藝學院園林園藝學院二O一五年五月年五月西瓜Rab18、BURPdomaincontainingprotein17基因的克隆、序列分析及表達研究I摘要分離與鑒定目的基因是研究基因結構、揭示基因功能和信號調控運輸的基礎，因此，克隆功能基因成為了生物科學領域研究的一個熱點。本研究從麒麟瓜葉子中提取出mRNA為試驗材料，通

3、過RACEPCR方法首次在麒麟瓜中克隆出了Rab18基因（GenBank登錄號:KM235552.1）和BURPdomaincontainingprotein17基因（GenBank登錄號:KM235553.1)，并在此基礎上，依據生物信息學工具初步分析了兩個基因的蛋白序列特性，為后續(xù)深入研究兩個基因在西瓜中的功能奠定基礎，也為克隆西瓜功能基因提供了一種新的方法。主要試驗方法和結論如下：1.根據西瓜EST數據庫中的已有序列，采用RACE

4、PCR的方法首次獲得Rab18基因的全長cDNA序列1010bp，包含645bp開放閱讀框，編碼214個氨基酸。利用Protparam軟件對其理化性質進行分析，可知Rab18蛋白的等電點為5.97，分子量為23762.12。利用EXPASY提供的軟件分析，結果表明Rab18蛋白不具有疏水性，是一類不含有信號肽的非跨膜蛋白，其蛋白序列二級結構由26.64%α螺旋，30.37%延伸鏈，9.35%β轉角，33.64%隨機卷曲組成。通過Clus

5、talW軟件進行序列同源性比對及進化樹分析，結果顯示西瓜Rab18基因與其他物種的氨基酸序列如黃瓜、甜瓜、桑葚、番茄、葡萄及馬鈴薯等有高度的同源性，分別為99%、98%、90%、89%、89%、88%。利用實時熒光定量分析顯示，西瓜Rab18基因在根、莖、葉中表達量較高，在花中表達量適度，在果實中表達量較弱。2.根據西瓜EST數據庫中的已有序列，并通過RACEPCR的方法首次獲得BURPdomaincontainingprotein17

6、基因的全長1085bpcDNA序列1085bp，包含開放閱讀框996bp，編碼331個氨基酸，利用Protparam軟件對其理化性質進行分析，可得BURPdomaincontainingprotein17基因的等電點為6.89，分子量為37446.12。利用EXPASY提供的軟件分析，BURPdomaincontainingprotein17蛋白具有疏水區(qū)域，是一類含有信號肽的跨膜蛋白，其蛋白序列二級結構由24.77%α螺旋，19.94