雙孢蘑菇POD的提取、純化及特性測定.pdf

1、過氧化物酶(peroxidase，POD)在果蔬中普遍存在，能催化許多反應(yīng)的進(jìn)行，種類繁多，通常也不會被其他酶所抑制，POD對于果蔬的采后貯藏褐變有極為重要影響。
　　對菇體無機(jī)械損傷、未開傘的雙孢蘑菇進(jìn)行試驗(yàn)，經(jīng)過勻漿抽提，固體硫酸銨分級沉淀，分別選用20％和80%飽和度的硫酸銨對雙孢蘑菇 POD粗酶液進(jìn)行鹽析得到粗提的酶液。將粗酶液進(jìn)行 DEAE-Cellulose-52陰離子交換層析和Sephadex G-100凝膠過濾層析

2、，最終獲得了雙孢蘑菇 POD的電泳純品，其相對分子質(zhì)量為74.08KDa，該酶比活力達(dá)到426.69U/mg，純化倍數(shù)為66.77，回收率為13.41%。
　　以愈創(chuàng)木酚為底物對初步純化的雙孢蘑菇 POD的酶學(xué)特性進(jìn)行了分析，測得米氏常數(shù) Km為5.704mmol/L，表明雙孢蘑菇 POD與愈創(chuàng)木酚的親和力較好。當(dāng) H2O2濃度為0.8%時 POD活性達(dá)到最大。POD的最適反應(yīng) pH為5.0，最適反應(yīng)溫度為45℃，在30-50℃之

3、間，保溫5h內(nèi)均具有良好的熱穩(wěn)定性，說明 POD的耐熱性比較強(qiáng)。七種化合物對雙孢蘑菇過氧化物酶活性的抑制效果由強(qiáng)到弱依次為：DTT＞ASA＞L-Cys＞SDS＞無水亞硫酸鈉＞檸檬酸＞NaCl。
　　分別采用低溫貯藏、保鮮劑和氣調(diào)處理雙孢蘑菇，并對其在貯藏期間的POD活性、菇體中心和菇肉的白度變化進(jìn)行了對比，結(jié)果表明：氣調(diào)貯藏雙孢蘑菇的POD酶活性最低，但抑制劑處理的白度值最高，說明 POD不是導(dǎo)致雙孢蘑菇褐變的直接原因。采用不同溫