水牛-豬異種體細(xì)胞核移植中甲基轉(zhuǎn)移酶的作用.pdf

1、核移植(Nuclear Transfer,NT)是一種研究細(xì)胞全能性時(shí)所需要用到一種重要的手段,本研究利用水牛的供體細(xì)胞作為NT的核供體,豬的卵母細(xì)胞作為核受體,進(jìn)行了異種體細(xì)胞核移植(intersperse Somatic Cell Nuclear Transfer,iSCNT),從iSCNT的角度來(lái)探討水牛的甲基轉(zhuǎn)移酶在重編程時(shí)候的作用。
　　我們首先對(duì)所獲得的水牛成纖維細(xì)胞系進(jìn)行了核型分析,發(fā)現(xiàn)所獲得的細(xì)胞系體細(xì)胞共有染色體

2、24對(duì)48條染色體,與水牛的核型相符。利用這株細(xì)胞系,我們進(jìn)行了iSCNT。并獲得了囊胚。我們首先對(duì)iSCNT形成的胚胎進(jìn)行了鑒定。首先是利用轉(zhuǎn)染了GFP的水牛成纖維細(xì)胞注入豬的卵母細(xì)胞中,發(fā)現(xiàn)后期形成的胚胎可以發(fā)出綠色熒光。其次,我們優(yōu)化了的iSCNT的胚胎培養(yǎng)體系,結(jié)果發(fā)現(xiàn)PZM-3是最合適培養(yǎng)iSCNT胚胎的培養(yǎng)液(3.88％vs0%)。而且,我們對(duì)比了iSCNT、豬同種核移植(SCNT)和孤雌激活(Parthenogenetic

3、 Activation,PA)胚胎的發(fā)育潛能,發(fā)現(xiàn),在分裂率上,iSCNT與SCNT相比具有顯著差異(77.19%vs46.81%),而與PA相比沒(méi)有顯著差異(77.19%vs66.29%)。而在囊胚率上,與SCNT相比有顯著差異,與PA相比具有極顯著差異。
　　最后,我們利用5’-Azacytidine,一種廣普型的甲基轉(zhuǎn)移酶(Dnmt)抑制劑,對(duì)iSCNT的供體細(xì)胞的Dnmt進(jìn)行了抑制,并通過(guò)qRT-PCR檢測(cè)了Dnmt1a和