檸檬生物活性成分分析及其組織培養(yǎng)技術(shù)研究.pdf

1、檸檬果實(shí)中生物活性成分種類多,含量豐富。隨著經(jīng)濟(jì)的高速發(fā)展和人民生活品質(zhì)的提高,越來越多的研究人員關(guān)注檸檬,研究檸檬果實(shí)中的生物活性成分在抗菌、抗癌、抗衰老、抗氧化、降血糖血脂等方面的功效。伴隨著各項(xiàng)檸檬相關(guān)的研究,運(yùn)用快繁技術(shù)改良果實(shí)品質(zhì)成為檸檬種植業(yè)的發(fā)展的必由之路,檸檬相關(guān)領(lǐng)域的保健品研究與開發(fā)正在興起。本論文對檸檬快繁技術(shù)進(jìn)行了初步的探索研究,并對檸檬中總膳食纖維、多酚類物質(zhì)、黃酮類物質(zhì)、檸檬苦素、主要金屬元素含量進(jìn)行了分類測定

2、,對檸檬活性多肽進(jìn)行了初步研究。
　　本文采用酶重量法,運(yùn)用凱氏定氮法和灰化法測定了蛋白質(zhì)和灰分的含量,定量測定了檸檬果實(shí)勻漿液中膳食纖維的含量。結(jié)果檸檬果實(shí)勻漿液膳食纖維含量為21.9mg/g,精密度和重復(fù)性表現(xiàn)良好,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差7.01％。
　　采用Folin-Ciocalteu比色法對檸檬勻漿液總多酚含量進(jìn)行測定。多酚標(biāo)準(zhǔn)品在濃度為0.1mg/mL-1.0mg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,標(biāo)準(zhǔn)曲線R2=0.999。測定檸檬

3、果實(shí)勻漿液提取液總多酚含量為1.224mg/mL,其中稀釋250倍、50倍、25倍的提取液的加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)精密度和重復(fù)性良好,RSD分別為:8.43％、2.27％、1.67％。
　　試驗(yàn)對檸檬總黃酮的含量進(jìn)行了測定,其中黃酮標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)量濃度在0-25ug/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,R2=0.9979。測定得到檸檬中總黃酮的含量為377.6ug/mL,方法精密度和重復(fù)性良好,RSD為6.6％。
　　實(shí)驗(yàn)利用超聲波提取的方法對檸檬中檸

4、檬苦素進(jìn)行提取,紫外分光光度法和高效液相進(jìn)行成分分析和檢測。其中,檸檬苦素標(biāo)準(zhǔn)品濃度在40mg/L-80mg/L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,R2=0.999。檸檬果汁未檢測出檸檬苦素。檸檬籽中其含量為61.04mg/L,重復(fù)性和精密度實(shí)驗(yàn)RSD分別為1.84％、1.93％。
　　初步對檸檬中多肽進(jìn)行分離及檢測,并對5KD-30KD多肽進(jìn)行超濾離心管截留。雙縮脲顯色反應(yīng)顏色變化為由無色到淺藍(lán)色,最后為紫色,表明有多肽或蛋白質(zhì)。經(jīng)SDS-PA

5、GE結(jié)果顯示:檸檬多肽樣品在10kD-15kD范圍內(nèi)出現(xiàn)了條帶,且條帶隨進(jìn)樣量增加逐漸加深;經(jīng)反相高效液相色譜洗脫檸檬多肽粗提物與重組人胰島素標(biāo)準(zhǔn)品,結(jié)果顯示在幾乎相同的保留時(shí)間有吸收峰出現(xiàn)。并對檸檬多肽樣品進(jìn)行梯度洗脫條件選擇,結(jié)果良好流動相流速為0.8mL/min,0-1min:A液為:90％、B液為10％;1-30min:A液為40％、B液為60％。
　　同時(shí),對檸檬中銅、鋅、鐵、硒四種微量元素進(jìn)行了測定。檸檬果實(shí)不同部位按

6、照特定的消解程序進(jìn)行消解,銅、鋅、鐵三種元素在最佳原子吸收光譜儀工作條件下,采用火焰原子吸收光譜法對其含量進(jìn)行測定。檸檬果實(shí)中,不同部位中銅、鋅、鐵含量分別為:檸檬果汁:0.709μg/kg,1.244μg/kg,14.312μg/kg;檸檬果皮0.787μg/kg,2.430μg/kg、12.971μg/kg;檸檬籽:3.384μg/kg,5.948μg/kg,29.773μg/kg。相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD％)在在0.44％-1.19％

7、之間,加標(biāo)回收率在在98.6％-108.3％之間,重復(fù)性實(shí)驗(yàn)相對標(biāo)準(zhǔn)偏差銅鋅、鐵分別在1.31％-7.58％。試驗(yàn)結(jié)果良好。采用原子熒光光譜法測定硒的濃度,標(biāo)準(zhǔn)品濃度在1.0μg/L-32μg/L范圍內(nèi)線型關(guān)系良好(R2=0.9998),精密度實(shí)驗(yàn)RSD為0.26％,加標(biāo)回收率為80.0％-112.5％之間。樣品不同部位硒的含量分別是:果汁0.0030μg/L,果皮0.0005μg/L,檸檬籽0.0014μg/L。
　　利用響應(yīng)面