凡納濱對蝦精巢組織細(xì)胞的培養(yǎng)及精莢低溫保存方法的建立.pdf

1、漁業(yè)經(jīng)濟(jì)在廣西大農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)中占有重要地位,凡納濱對蝦養(yǎng)殖業(yè)是漁業(yè)經(jīng)濟(jì)的支柱產(chǎn)業(yè)之一。選育優(yōu)良品種、調(diào)控性別對凡納濱對蝦養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展具有重要意義。通過對凡納濱對蝦精巢組織內(nèi)生精上皮細(xì)胞的培養(yǎng),可以進(jìn)一步研究生精上皮內(nèi)的精原干細(xì)胞,并由此開展對蝦精子生成的分子學(xué)和細(xì)胞學(xué)、對蝦的發(fā)育生物學(xué)及繁殖學(xué)等研究。與此同時(shí),凡納濱對蝦精莢的低溫保存研究,為進(jìn)行精子篩選、人工授精等對蝦品種選育研究工作提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ),對凡納濱對蝦遺傳多樣性保護(hù)、遺傳育種和生產(chǎn)具

2、有重要意義。
　　1.凡納濱對蝦精巢組織細(xì)胞的培養(yǎng)
　　本實(shí)驗(yàn)是在無菌條件下,對凡納濱對蝦進(jìn)行解剖,摘取精巢組織,機(jī)械剪碎處理組織后,篩網(wǎng)過濾的方法獲得細(xì)胞,以添加了1mol/L HEPES緩沖液、20％胎牛血清、100IU/ml青-鏈霉素雙抗溶液的M199為培養(yǎng)基,在28℃恒溫、90%濕度的環(huán)境下,對凡納濱對蝦的精巢組織細(xì)胞進(jìn)行原代培養(yǎng),通過倒置顯微鏡進(jìn)行貼壁情況觀察,并對細(xì)胞HE染色進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察。在本實(shí)驗(yàn)中,在培養(yǎng)凡納

3、濱對蝦精巢組織細(xì)胞24h后,可觀察到細(xì)胞出現(xiàn)貼壁,一些細(xì)胞貼壁后即分化成為成纖維細(xì)胞和上皮樣細(xì)胞,細(xì)胞在體外可存活7d。
　　2.凡納濱對蝦精莢低溫保存方法的建立
　　本實(shí)驗(yàn)是在無菌條件下,將凡納濱對蝦的精莢采集到EP管中,加入由I型液態(tài)鼠尾膠原、2×1640濃縮培養(yǎng)液、胎牛血清和可溶性基底膜基質(zhì)配制而成的培養(yǎng)層,封口后于4℃環(huán)境下保存。用伊紅苯胺黑染色檢測30d內(nèi)精莢中精子存活率,用 SPSS17.0軟件統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)。在本實(shí)驗(yàn)