雷州黑鴨Pax3、DCN和MSTN基因在胚胎期骨骼肌中差異性表達(dá)研究.pdf

1、鴨肌纖維的生長(zhǎng)發(fā)育情況與鴨肉品質(zhì)性狀密切相關(guān),在肌纖維的形成以及生長(zhǎng)發(fā)育過程中,Pax3、DCN和MSTN基因?qū)趋兰〉纳硖匦云鸬經(jīng)Q定性作用。為進(jìn)一步了解Pax3、DCN和MSTN基因與雷州黑鴨骨骼肌形成的密切關(guān)系,以及在骨骼肌形成過程中相互之間的功能聯(lián)系,為改善雷州黑鴨肉品質(zhì)打下分子基礎(chǔ)。本研究對(duì)雷州黑鴨第8、13、18、23、28天胚胎的胸肌和腿肌進(jìn)行組織切片觀察,并采用QRT-PCR與 western-blot試驗(yàn)方法檢測(cè)了 P

2、ax3、DCN和MSTN基因在以上各階段胸腿肌中mRNA與蛋白的發(fā)育性表達(dá)情況。同時(shí)用 QRT-PCR法檢測(cè)了雷州黑鴨28胚齡時(shí)Pax3、DCN和MSTN基因在心、肝、脾、肺、肌胃、小腸、腦、胸肌、腿肌中mRNA的差異性表達(dá)量。本研究采用了RT-PCR法對(duì)雷州黑鴨DCN基因序列的CDS區(qū)全長(zhǎng)進(jìn)行了克隆,并構(gòu)建了pcDNA3.1myc-His(-)A-DCN真核表達(dá)載體。 研究結(jié)果表明:
　　(1)從不同胚胎期的胸肌、腿肌組織

3、切片可見,胚胎發(fā)育過程中雷州黑鴨骨骼肌的形成經(jīng)歷了成肌細(xì)胞,多核肌管,肌纖維形成的過程。雷州黑鴨胚胎期腿肌的發(fā)育明顯早于胸肌,且腿肌為早熟部位,胸肌為晚熟部位。
　　(2)本研究采用熒光定量PCR的方法,對(duì)胚胎期雷州黑鴨Pax3基因在骨骼肌中的時(shí)空性差異性表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果表明,在不同胚胎期胸肌組織中,Pax3基因mRNA表達(dá)水平在23d時(shí)達(dá)到高峰,在18d時(shí)表達(dá)量最少;在腿肌組織中Pax3基因mRNA表達(dá)水平均在28d時(shí)達(dá)到高峰

4、,在18d時(shí)表達(dá)量最少;在28胚齡期的雷州黑鴨內(nèi)臟組織中,Pax3基因在腿肌中的表達(dá)水平最高,在脾臟中第二,緊接著是胸肌。并采用western-blot的方法,對(duì)Pax3基因在雷州黑鴨胚不同胚胎期的胸肌、腿肌組織中蛋白表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果表明,在胸肌組織中,Pax3蛋白在23胚齡時(shí)表達(dá)量最高,13胚齡時(shí)最低;在腿肌組織中28胚齡時(shí)表達(dá)量最高,8胚齡時(shí)表達(dá)量最低。
　　(3)胚胎期雷州黑鴨DCN基因在骨骼肌中的時(shí)空性差異性表達(dá)進(jìn)行

5、檢測(cè)。結(jié)果表明,在不同胚胎期胸肌組織中,DCN基因mRNA表達(dá)水平在28d時(shí)達(dá)到高峰,在8d時(shí)表達(dá)量最少;在腿肌組織中DCN基因mRNA表達(dá)水平均在28d時(shí)達(dá)到高峰,在8d時(shí)表達(dá)量最少;在28胚齡雷州黑鴨內(nèi)臟組織中,DCN基因在胸肌中的表達(dá)量第一,第二是腿肌。并采用western-blot的方法,對(duì)DCN基因在雷州黑鴨胚不同胚胎期的胸肌、腿肌組織中蛋白表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果表明,DCN蛋白在胸肌組織中23胚齡表達(dá)量達(dá)最高,在13胚齡時(shí)最

6、低;在腿肌組織中28胚齡時(shí)表達(dá)量最高,8胚齡時(shí)表達(dá)量最低。
　　(4)本研究采用熒光定量 PCR的方法,對(duì)胚胎期雷州黑鴨 MSTN基因在骨骼肌中的時(shí)空性差異性表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果表明,在不同胚胎期胸肌組織中,MSTN基因mRNA表達(dá)水平在23d時(shí)達(dá)到高峰,在8d時(shí)表達(dá)量最少;在腿肌組織中MSTN基因mRNA表達(dá)水平在28d時(shí)最高,在13d時(shí)表達(dá)量處于最低谷;在28胚齡雷州黑鴨內(nèi)臟組織中,MSTN基因在腿肌中的表達(dá)量最高,第二是胸肌。

7、并采用western-blot的方法,對(duì) MSTN基因在雷州黑鴨胚不同胚胎期的胸肌、腿肌組織中蛋白表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果表明,MSTN蛋白在胸肌組織中23胚齡時(shí)表達(dá)量達(dá)最高,8胚齡時(shí)最低;在腿肌組織中28胚齡時(shí)表達(dá)量最高,8胚齡時(shí)表達(dá)量最低。
　　(5)本研究成功的克隆雷州黑鴨DCN基因CDS區(qū)全長(zhǎng),并通過生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn),雷州黑鴨的DCN基因與雞的遺傳距離最近。對(duì) DCN蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)進(jìn)行預(yù)測(cè)時(shí),發(fā)現(xiàn)雷州黑鴨DCN蛋白不存在跨膜結(jié)