應(yīng)用噬菌體防治弧菌引發(fā)的刺參腐皮綜合征.pdf

1、刺參腐皮綜合征是目前刺參養(yǎng)殖最常見、危害最為嚴(yán)重的疾病之一，嚴(yán)重制約了刺參養(yǎng)殖業(yè)的持續(xù)健康發(fā)展。當(dāng)前刺參腐皮綜合征的防治主要依賴于化學(xué)消毒劑和抗生素，長期使用會引發(fā)藥物殘留、病原菌產(chǎn)生耐藥性和水體環(huán)境污染等問題。本研究探索應(yīng)用裂解性噬菌體防治刺參腐皮綜合征，為刺參的健康養(yǎng)殖提供一條新途徑。
　　從大連地區(qū)患腐皮綜合征的刺參體壁組織中，采用平板分離技術(shù)分離細(xì)菌。純化培養(yǎng)后，通過人工回接感染實驗驗證分離的菌株是否為刺參腐皮綜合征的病原

2、菌。利用形態(tài)學(xué)觀察、生理生化指標(biāo)及16SrDNA序列分析對病原菌進(jìn)行分類鑒定。分離得到兩株弧菌VDL-1和VDL-2，人工回接感染實驗中，患病刺參的癥狀與自然發(fā)病的癥狀相同，說明VDL-1和VDL-2是刺參腐皮綜合征的病原菌，且VDL-2的致病力比VDL-1強(qiáng)。細(xì)菌VDL-1和VDL-2均無莢膜，具有極生單鞭毛，短桿狀，兩端鈍圓。VDL-1和VDL-2的L-苯丙氨酸、PNP-磷酸鹽和甘氨酸生理生化指標(biāo)不同。經(jīng)分類鑒定，VDL-1為嗜環(huán)弧

3、菌（Vibriocyclitrophicus），VDL-2為塔斯馬尼亞弧菌（Vibriotasmaniensis）。
　　將已分離的病原菌作為宿主菌，采用雙層平板法從養(yǎng)殖海水中分離噬菌體，對噬菌體進(jìn)行透射電鏡觀察，表征氯仿敏感性、宿主譜、潛伏期、裂解量等噬菌體生物特性。通過測定細(xì)菌與噬菌體共培養(yǎng)物在600nm處的吸光值來考察噬菌體對病原菌的體外裂解效果。篩選得到裂解VDL-1的噬菌體PVDL-1，PVDL-1屬于長尾噬菌體科，感染

4、宿主菌的潛伏期約35min，裂解量約218PFU/cell。篩選得到VDL-2的裂解性噬菌體PVDL-2，PVDL-2屬于肌尾噬菌體科，感染宿主菌的潛伏期約30min，裂解量約110PFU/cell。PVDL-1和PVDL-2宿主專一性強(qiáng)，均對氯仿不敏感。在體外，PVDL-1對VDL-1有很好的裂解作用，PVDL-2與VDL-2共培養(yǎng)6h后，VDL-2產(chǎn)生抗PVDL-2的抗性菌株。
　　噬菌體治療實驗采用浸浴的給藥方式。通過對比陰