小麥赤霉菌FgCPKRD基因的敲除及致病相關(guān)性研究.pdf

1、小麥赤霉菌[Fusarium graminearum Schwabe]是小麥、大麥和玉米等作物的主要病原菌之一。其典型病害是引起小麥赤霉病。小麥赤霉病致使作物產(chǎn)量和品質(zhì)下降，其產(chǎn)生的真菌毒素對人和動(dòng)物造成傷害。本實(shí)驗(yàn)基于反向遺傳學(xué)的策略，運(yùn)用split PCR的方法構(gòu)建含有hph（潮霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶基因）的基因敲除盒，通過PEG介導(dǎo)的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化和體內(nèi)同源重組得到抗潮霉素的轉(zhuǎn)化子;對轉(zhuǎn)化子進(jìn)行PCR篩查，得到PCR陽性FgCPKR基因缺失

2、突變體，根據(jù)該突變體表型變化及致病性的檢測對FgCPKR基因的功能進(jìn)行分析，獲得到以下結(jié)果:
　　1.以小麥赤霉菌野生型PH-1基因組DNA和質(zhì)粒pCB1003 hph基因，采用split-marker技術(shù)，成功構(gòu)建了FgCPKR基因敲除盒。
　　2.用所得敲除盒，通過PEG介導(dǎo)轉(zhuǎn)化小麥赤霉菌原生質(zhì)體，獲得轉(zhuǎn)化子。經(jīng)PCR篩查，得到3個(gè)PCR陽性FgCPKR基因缺失突變體(△fgcpkr)。
　　3.表型分析可見，△f