tPA和PAI-1在牛卵丘卵母細(xì)胞復(fù)合體體外成熟進(jìn)程中的作用初探.pdf

1、為了解組織型纖溶酶原激活劑(tissue plasminogen activator，tPA)和纖溶酶原激活劑抑制劑1(plasminogen activator inhibitor，PAI-1)在牛卵丘-卵母細(xì)胞復(fù)合體（COCs）體外成熟進(jìn)程中的可能作用；本研究首先運(yùn)用了實(shí)時(shí)定量RT-PCR和ELISA技術(shù)檢測了體外不同成熟時(shí)間（0 h、8 h、16 h和24 h）卵丘細(xì)胞中纖溶酶原（plasminogen）基因相對表達(dá)變化和tPA活

2、性變化，然后通過添加不同濃度的tPA（0 ng/ml、0.1 ng/ml、1 ng/ml、10 ng/ml）、PAI-1(0 ng/ml、0.1 ng/ml、1 ng/ml、10 ng/ml)觀察透明質(zhì)酸合成酶2（Hyaluronan synthase2,HAS2）基因在體外成熟培養(yǎng)16h牛卵丘細(xì)胞中相對表達(dá)變化。最后以1ng/ml tPA與10ng/ml PAI做添加組合，在體外成熟培養(yǎng)16h后，統(tǒng)計(jì)牛卵丘細(xì)胞中HAS2基因相對表達(dá)，

3、牛卵母細(xì)胞中GDF-9、BMP-15基因相對表達(dá)，以及牛COCS的擴(kuò)散程度。結(jié)果如下：
　　1.在COCs體外成熟過程中，牛卵丘細(xì)胞Plasminogen mRNA相對表達(dá)，在成熟8 h和24 h顯著高于0 h和16 h(P<0.05)；同時(shí)卵丘細(xì)胞中的tPA活性在成熟培養(yǎng)8 h和24 h均高于16 h且差異顯著(P<0.05)。
　　2.分別添加不同濃度tPA、PAI-1(0 ng/ml、0.1 ng/ml、1 ng/ml

4、、10 ng/ml)體外成熟16 h后，HAS2基因在各tPA添加組卵丘細(xì)胞中的相對表達(dá)水平低于對照組，其中1ng/ml添加組最低，與對照組相比差異顯著(P<0.05)；添加不同濃度PAI-1處理后，在1ng/ml和10ng/ml添加組卵丘細(xì)胞中的HAS2 mRNA相對表達(dá)水平顯著高于對照組，其中10ng/ml添加組最高。
　　3.以1ng/mltPA和10ng/mlPAI-1做添加組合，在體外成熟16 h后發(fā)現(xiàn)，在PAI-1添加

5、組中，卵丘細(xì)胞的HAS2 mRNA相對表達(dá)水平顯著高于其他各處理組(P<0.05)；卵丘層的擴(kuò)散程度顯著高于對照組和tPA添加組(P<0.05)。同時(shí)卵母細(xì)胞中BMP-15和GDF-9的 mRNA相對表達(dá)水平在tPA添加組最高，PAI-1添加組最低，倆者差異顯著(P<0.05)。
　　綜上，tPA在體外成熟早期（8h前后）可能有重要作用。在體外成熟16h，PAI-1在促進(jìn)牛卵丘細(xì)胞表達(dá) HAS2基因和擴(kuò)散發(fā)生的同時(shí)又下調(diào)了卵母細(xì)胞