綿羊YAP1基因與肌肉生長相關基因表達相關分析以及載體構建的研究.pdf

1、本實驗以湖羊為研究對象，利用基因克隆技術克隆綿羊YAP1基因cDNA全長序列，并利用生物學分析軟件對綿羊YAP1基因與其他物種的同源性，其蛋白的理化性質，二級結構和三級結構進行了生物信息學分析;利用熒光定量PCR技術對綿羊YAP1基因在出生后二日齡，二月齡和六月齡不同公母在四種不同骨骼?。ū匙铋L肌、比目魚肌、腓腸肌、趾長伸?。┑南鄬Ρ磉_進行了分析;并利用RT-PCR、載體構建和定點突變技術，構建了pEGFP-C1-YAP1，及其磷酸化位

2、點突變體pEGFP-C1-YAP1 S42A真核表達載體。旨在探索YAP1在綿羊出生前和出生后肌肉生長過程中的調(diào)控機制，為湖羊肌肉生長性狀的選育提供遺傳學資料。本研究獲得了一下結果:
　　1.克隆獲得綿羊YAP1基因序列全長為1712 bp，其中包括編碼區(qū)1212bp，5' UTR27bp和3' UTR473bp，共編碼403個氨基酸。同源性分析發(fā)現(xiàn)，綿羊YAP1核苷酸序列與推測的氨基酸序列與灰倉鼠的同源性最高，分別達到78.77

3、％和92.51％，而與人、黑猩猩的一致性差異較小。氨基酸序列分析得到，綿羊YAP1基因編碼蛋白為水溶性蛋白，相對分子量為44079.0Da，理論等電點為4.91，無信號肽序列和跨膜區(qū);亞細胞定位主要在細胞核，不屬于分泌蛋白;預測含有33個磷酸化位點，7個糖基化位點，具有兩個WW結構域，二級結構以無規(guī)則卷曲為主，三級結構顯示，YAP1結構域區(qū)構成彎曲狀螺旋結構。預測YAP1蛋白主要在調(diào)節(jié)功能過程中有著關鍵作用。
　　2.綿羊YAP1

4、基因在不同肌肉中的表達存在顯著差異，其中在腓腸肌中相對表達最高，在背最長肌中最低，在不同生長階段（二日齡、二月齡和六月齡）的比較中，YAP1的表達隨月齡的增加而升高。YAP1在公母間表達的差異不顯著。YAP1與肌球蛋白重鏈(MyHCⅠ、ⅡA、ⅡX)、MSTN、MyoG的表達關聯(lián)性分析表明，YAP1與MyHCⅠ呈極顯著負相關，與MyHCⅡ X、MSTN、MyoG呈極顯著正相關，揭示YAP1與出生后肌纖維的發(fā)育有關聯(lián)，可能參與了肌球蛋白重鏈