遼寧絨山羊蛋白脂質(zhì)蛋白質(zhì)基因(PLP2)的表達研究.pdf

1、遼寧絨山羊是我國特有的禁止基因外流的寶貴遺傳資源，產(chǎn)絨量居全國第一。在前期工作中，我們通過建庫及Primer walking質(zhì)粒測通的方法克隆篩選出蛋白脂質(zhì)蛋白質(zhì)基因(proteolipid protein2，PLP2)的全長序列。為了探究該基因的功能，我們對其進行了生物信息學分析（包括預測其開放閱讀框，親疏水性分析、跨膜預測分析、信號肽預測分析、磷酸化位點預測分析、二級結(jié)構(gòu)預測、進化樹的構(gòu)建、多重序列的比對、保守結(jié)構(gòu)域搜索），Real

2、-time PCR，RT-PCR，原位雜交以及Noggin基因干擾慢病毒感染后目的基因的qPCR檢測等的一系列分析研究。
　　分析結(jié)果顯示:首先，通過生物信息學分析，我們發(fā)現(xiàn)PLP2基因能夠編碼含有152個氨基酸的蛋白質(zhì)，二級結(jié)構(gòu)預測顯示，PLP2基因含有α螺旋結(jié)構(gòu)(46.05％)、延伸結(jié)構(gòu)(12.5％)和無規(guī)卷曲結(jié)構(gòu)(41.45％)，功能位點分析顯示，PLP2含有MARVEL結(jié)構(gòu)域并且存在4個跨膜區(qū)，不存在信號肽，PLP2氨基酸

3、含有3個Ser、2個Tyr和1個Thr可能成為蛋白激酶磷酸化位點;其次，通過RT-PCR檢測顯示，PLP2基因在皮膚、心臟、肝臟、腎臟、肺、脾臟中均有表達，且表達差異不是很明顯，其中皮膚中的表達含量相對較高;同時，還運用了熒光定量PCR技術，定量的檢測其在不同時期的表達情況，發(fā)現(xiàn)在興盛期時，PLP2基因在次級毛囊的表達量約為初級毛囊的1.02倍(0.01＜P＜0.05)，在退行期時，PLP2基因的表達量仍是次級毛囊高于初級毛囊，是初級毛

4、囊的1.16倍(0.01＜P＜0.05);另外，經(jīng)過原位雜交分析，發(fā)現(xiàn)PLP2基因在內(nèi)根鞘有表達，而在外根鞘、毛干（角質(zhì)層、皮層和髓層）以及毛囊乳突中無表達;最后，通過Noggin基因干擾后PLP2基因的qPCR檢測，顯示空白組的表達量是NC陰性對照的1.15倍，而noggin干擾后PLP2的表達量是NC陰性對照組的0.64倍。
　　結(jié)論:(1) PLP2基因在皮膚、心臟、肝臟、腎臟、肺、脾臟各個組織中都有表達，這說明PLP2與各