亮甲酚監(jiān)染色分選后的豬卵母細(xì)胞體外發(fā)育能力的鑒定.pdf

1、在豬胚胎生產(chǎn)中，主要從屠宰場(chǎng)采集卵巢.由于挑選的卵母細(xì)胞來(lái)自不同生長(zhǎng)階段的卵泡，導(dǎo)致了卵母細(xì)胞質(zhì)量存在差異。本研究通過(guò)亮甲酚藍(lán)染色分選后對(duì)豬卵母細(xì)胞體外發(fā)育能力進(jìn)行系統(tǒng)性的鑒定與研究，進(jìn)一步對(duì)亮甲酚藍(lán)篩選優(yōu)質(zhì)卵母細(xì)胞的方法進(jìn)行驗(yàn)證，為保證核移植效率提供優(yōu)質(zhì)的卵母細(xì)胞。
　　 本研究利用13μmol/L亮甲酚藍(lán)(BCB)對(duì)GV期豬卵母細(xì)胞進(jìn)行染色，分別檢查了著色組(BCB+)、無(wú)著色組(BCB-)和對(duì)照組的卵母細(xì)胞直徑、體外成熟情

2、況、皮質(zhì)顆粒遷移程度、成熟后谷胱甘肽GSH水平、乙酰熒光素FDA活力、孤雌胚胎發(fā)育能力與核移植胚胎的發(fā)育能力，為體細(xì)胞核移植提供優(yōu)質(zhì)的卵母細(xì)胞。在此基礎(chǔ)上，初步研究了初次卵裂時(shí)間與孤雌胚胎發(fā)育潛能的關(guān)系。BCB染色后，對(duì)成熟卵母細(xì)胞進(jìn)行孤雌激活，在激活后24 h挑選出卵裂的胚胎，將其轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)滴中繼續(xù)培養(yǎng)，剩余未卵裂的胚胎在激活后48 h重復(fù)上述步驟，以0-48 h未分時(shí)間段的胚胎作為一組，胚胎培養(yǎng)144 h后，比較不同卵裂時(shí)間的胚

3、胎發(fā)育能力，預(yù)測(cè)早期胚胎的發(fā)育潛能，為豬克隆胚胎移植提供優(yōu)質(zhì)的胚胎。
　　 研究結(jié)果表明：
　　 1)BCB染色后，豬卵母細(xì)胞直徑測(cè)量與體外成熟情況：BCB+組卵母細(xì)胞直徑大于BCB-組和對(duì)照組(120.47μm，104.94μm和114.81μm)。BCB+組卵母細(xì)胞成熟率為79.61％，BCB-組卵母細(xì)胞成熟率為53.51%，對(duì)照組卵母細(xì)胞成熟為63.64%，各組之間差異顯著(P<0.05)；染色組成熟率為66.59

4、%，與對(duì)照組無(wú)顯著差異(P>0.05)。
　　 2)BCB染色后，豬卵母細(xì)胞皮質(zhì)顆粒遷移程度、GSH水平和FDA活力檢測(cè)；BCB+組卵母細(xì)胞皮質(zhì)顆粒遷移完全的比例為79.79%，BCB-組為27.06%，對(duì)照組的為48.87%，各組之間差異顯著(P<0.05)。BCB+組成熟卵母細(xì)胞GSH含量顯著高于(P<0.05)BCB-組和對(duì)照組(10.41pmol/oocyte、5.84pmol/oocyte和6.77pmol/oocyt

5、e)。BCB+組卵母細(xì)胞FDA活力率為91.43%，BCB-組為54.32%，對(duì)照組為72.11%，各組之間差異顯著(P<0.05)。BCB+卵母細(xì)胞胞質(zhì)成熟完全，有利于卵母細(xì)胞的后期發(fā)育。
　　 3)BCB染色后，豬卵母細(xì)胞的孤雌胚胎發(fā)育情況與核移植胚胎發(fā)育情況：BCB+組孤雌囊胚率為34.28%、核移植囊胚率為23.74%顯著高于(P<0.05)BCB-組(12.25%，6.28%)和對(duì)照組(26.52%，17.05%)，且

6、BCB+組囊胚的細(xì)胞數(shù)最多。
　　 4)初次卵裂時(shí)間與孤雌胚胎發(fā)育潛能的關(guān)系：BCB+組0-24h卵裂的孤雌囊胚率為44.59%，25-48h為22.86%，0-48h為35.01%，各組之間差異顯著(P<0.05)。BCB-組0-24h卵裂的囊胚率為22.58%高于25-48h(8.59%)和0-48h(12.47%)。對(duì)照組0-24h卵裂的囊胚率為35.54%高于其他兩個(gè)時(shí)期的囊胚率(25-48h為15.88%、0-48h為