大菱鲆干擾素調(diào)節(jié)因子2(IRF2)的全長(zhǎng)cDNA克隆與三種mRNA拼接變異體的組織分布研究.pdf

1、大菱鲆(Scophthalmus maximus)原產(chǎn)于歐洲，自引進(jìn)我國(guó)后已經(jīng)成為我國(guó)北方重要的海水養(yǎng)殖魚類品種，其英文名為turbot。近年來，大菱鲆病毒性疾病的泛濫給我國(guó)大菱鲆的養(yǎng)殖業(yè)帶來了直接的經(jīng)濟(jì)損失。因此，對(duì)大菱鲆干擾素系統(tǒng)的深入研究具有重要的理論和現(xiàn)實(shí)意義。目前，大菱鲆 IRF2(SmIRF2)尚未被克隆和研究。
　　本文采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）、同源PCR克隆(Homology PCR Clonin

2、g)和cDNA末端快速擴(kuò)增(Rapid Amplification of cDNA ends, RACE)技術(shù)，從大菱鲆組織中獲得IRF2基因的全長(zhǎng)cDNA序列及基因組序列。研究發(fā)現(xiàn)大菱鲆IRF2基因有三種mRNA拼接變異體，且它們的5'非翻譯區(qū)相同。三種mRNA拼接變異體的長(zhǎng)度分別為1807bp、1678bp和1506bp，且在第三種mRNA拼接變異體中發(fā)現(xiàn)了微衛(wèi)星序列。大菱鲆IRF2基因組DNA全長(zhǎng)11891bp，包含10個(gè)外顯子，

3、9個(gè)內(nèi)含子。大菱鲆IRF2由于存在mRNA拼接變異體，可以編碼2類蛋白質(zhì)，通過與其他脊椎動(dòng)物的IRF2氨基酸序列進(jìn)行多重比對(duì)，發(fā)現(xiàn)大菱鲆IRF2所編碼的氨基酸序列與其他脊椎動(dòng)物的IRF2具有較高的同源性。且大菱鲆IRF2所編碼的氨基酸序列也具有典型的DNA結(jié)合域（DNA binding domain, DBD）、激活結(jié)構(gòu)域（Activation domain, AD）和抑制結(jié)構(gòu)域（Repression domin, RD）。系統(tǒng)進(jìn)化分析

4、表明大菱鲆IRF2屬于IRF1亞家族的成員。
　　采用RT-PCR方法對(duì)IRF2基因的三種mRNA拼接變異體在健康大菱鲆腦、鰓、胃、腸、心、頭腎、體腎、肝、脾、性腺、肌肉和皮膚12個(gè)組織中表達(dá)分布情況進(jìn)行了研究。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，IRF2三種mRNA拼接變異體在各個(gè)組織中呈組成型表達(dá)。mRNA拼接變異體1的表達(dá)都較弱，為次要類型，mRNA拼接變異體2、3為主要類型。mRNA拼接變異體1在腎臟中表達(dá)較高，mRNA拼接變異體2在腎臟、脾臟