我國動(dòng)物源金黃色葡萄球菌的耐藥性和分型研究.pdf

1、金黃色葡萄球菌是革蘭氏陽球菌，它廣泛分布于自然界中，能感染人和動(dòng)物，是一種重要的人獸共患病原菌;其產(chǎn)生的腸毒素可污染食物而致人食物中毒，嚴(yán)重威脅人類的食品安全和公共衛(wèi)生。近年來，耐藥菌株（尤其是甲氧西林耐藥金黃色葡萄球菌，即MRSA）的增加給臨床治療帶來很大困難。研究我國動(dòng)物源金黃色葡萄球菌的耐藥性現(xiàn)狀及通過表型分型和基因分型了解菌株的分布情況，辨別我國的流行菌株和非流行菌株，同時(shí)比較各地區(qū)金黃色葡萄球菌菌株之間的相關(guān)性，對(duì)于獸醫(yī)臨床及

2、公共衛(wèi)生都有重要意義。
　　 本研究從2008年至2010年，收集并分離到我國不同地區(qū)的不同動(dòng)物源（主要是豬源和牛源）金黃色葡萄球菌共124株。分離鑒定過程采用科馬嘉顯色培養(yǎng)基對(duì)樣本進(jìn)行初篩，并用梅里埃API拭條和凝固酶試驗(yàn)確證，同時(shí)使用PCR方法擴(kuò)增nucgene進(jìn)一步從基因水平鑒定，分離率達(dá)到16％。
　　 選用13種抗生素，采用微量肉湯稀釋法對(duì)分離到的菌株進(jìn)行耐藥性分析。結(jié)果顯示，MRSA檢出率為27％，主要分布在

3、豬源菌株;受試菌株對(duì)氨芐西林、青霉素和紅霉素的耐藥率最高，分別為97％、86％和75％，對(duì)其余抗生素的耐藥率在50％-0％之間，未發(fā)現(xiàn)萬古霉素耐藥菌株。選擇頭孢西丁耐藥菌株，對(duì)其進(jìn)行甲氧西林耐藥基因mecA的擴(kuò)增，結(jié)果表明mecA基因的攜帶與頭孢西丁耐藥表型的完全相符。
　　 用商品化的凝固酶分型血清對(duì)分離菌株進(jìn)行凝固酶分型研究。分型結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)室分離株的優(yōu)勢(shì)血清型為凝固酶Ⅶ型，Ⅵ型和復(fù)合型，沒有Ⅲ型和Ⅴ型，分型率達(dá)到91％，

4、牛源菌株和豬源菌株的流行血清型存在較大差異。我國動(dòng)物源金黃色葡萄球菌凝固酶血清型別多樣，分布相對(duì)集中，具有獨(dú)特的流行特征。結(jié)合凝固酶表型分型，擴(kuò)增凝固酶基因，對(duì)基因序列進(jìn)行比對(duì)分析，共擴(kuò)增出400-1，000bp大小不同的凝固酶基因片段，共6種，構(gòu)建了36株菌株凝固酶基因的系統(tǒng)進(jìn)化樹。進(jìn)化樹體現(xiàn)了凝固酶基因的多樣性，基于該基因的分型方法的分辨力比表型分型高。
　　 采用核糖體基因分型(ribotyping)和多位點(diǎn)序列分型（ML

5、(去)對(duì)本試驗(yàn)中不同血清型及不同耐藥譜的金黃色葡萄球菌分離株進(jìn)行了基因分型研究。核糖體分型結(jié)果顯示，牛源菌株和豬源菌株在聚類圖譜上有著不同的進(jìn)化方向;不同凝固酶型的菌株在各種杜邦型別之間均有分布，同一凝固酶血清型的菌株基因相似度從50％至100％不等;同一地區(qū)（養(yǎng)殖場(chǎng)）的分離株基因相似度較高。MLST分型結(jié)果表明，ST9為我國動(dòng)物源金黃色葡萄球菌的優(yōu)勢(shì)序列型，MRSA分離株均為ST9型，MSSA菌株中出現(xiàn)ST9、ST398、ST97等9