生牛乳中金黃色葡萄球菌的快速檢測及耐藥性研究.pdf

1、金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus，S. aureus）是常見的食源性致病菌，廣泛存在于自然環(huán)境中；S. aureus在適當(dāng)?shù)臈l件線，能夠產(chǎn)生腸毒素，引起食物中毒。S. aureus是奶牛乳房炎的主要病原菌，抗生素的濫用導(dǎo)致耐藥性金黃色葡萄球菌的出現(xiàn)并泛濫，同時增加了多重耐藥的危險，這對人類的健康造成直接威脅。因此，對于食源性耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的耐藥性及危害性的研究關(guān)乎人類的身心健康，具有積極的意義。

2、>　　本次研究從濟(jì)南市各大奶牛場采集130份生牛乳樣品，利用生化鑒定法鑒定出樣品中的 S. aureus；利用基質(zhì)輔助激光解吸電離-飛行時間-質(zhì)譜(MALDI-TOF-MS)技術(shù)對金黃色葡萄球菌進(jìn)行鑒定，驗證其快速檢測食源致病菌的可行性；采用金黃色葡萄球菌腸毒素檢測試劑盒對鑒定出的S. aureus進(jìn)行腸毒素檢測；利用PCR法對S. aureus腸毒素進(jìn)行分型；采用微量肉湯稀釋法進(jìn)行抗生素敏感實驗，檢測S. aureus主要研究結(jié)果如下

3、：
　?。?）采集的130份生鮮牛乳樣品來自濟(jì)南6個不同地區(qū)，采集形式分為生鮮乳收購站采集樣品與奶牛運輸車采集樣品，利用傳統(tǒng)生化鑒定與API法鑒定，共有57份樣品判定檢出金黃色葡萄球菌，平均檢出率為44.62％。JA1到JA6地區(qū)生鮮乳樣均有金黃色葡萄球菌檢出，從實驗結(jié)果可以看出，6個地區(qū)生鮮乳收購站樣品中金黃色葡萄球菌檢出率均高于生鮮乳運輸車；雖然污染程度差異明顯，但總體污染程度均低于1000CFU/ml。
　　(2)對實

4、驗獲得的57株金黃色葡萄球菌進(jìn)行腸毒素的檢測，利用酶聯(lián)免疫法與膠體金快速檢測試紙條鑒定出11株產(chǎn)腸毒素菌株，產(chǎn)毒結(jié)果為SEA型、SEB型和SEB型。利用PCR法對57株金黃色葡萄球菌進(jìn)行腸毒素基因的檢測，腸毒素基因分型結(jié)果顯示，共有57株菌株中共有有SEA、SEB、SEC、SEE、SEG和SHE型6種腸毒素基因型，各類型的腸毒素菌株在地區(qū)分部較為均勻，差異不明顯，其中以SEG和SHE型腸毒素的菌株數(shù)量最多（SEG：52.63%，30/5

5、7；SHE：36.84%，21/57）。
　　(3)對57株金黃色葡萄球菌進(jìn)行藥物敏感實驗，利用微量肉湯稀釋法，選取12種抗生素藥物，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，對青霉素耐藥的菌株最多，耐藥率87.72%，其次為氨芐西林，耐藥率84.21%，另外對紅霉素，克林霉素的耐藥性也較高；共有50株金黃色葡萄球菌均具有多重耐藥性；多重耐藥菌株主要來自JA1、JA2、JA3地區(qū)，在這其中以耐3種藥物與耐5種藥物的菌株數(shù)量最高，而耐藥譜種類較多，受地區(qū)間差異影響

6、較大。
　　(4)利用MALDI-TOF MS檢測鑒定樣品中的金黃色葡萄球菌，與傳統(tǒng)生化鑒定發(fā)和API法進(jìn)行對比，MALDI-TOF MS對57株金黃色葡萄球菌在屬水平上的鑒定結(jié)果可信度均超過了95%，與傳統(tǒng)生化鑒定和 API法結(jié)果一致。證明了MALDI-TOF MS在食源性致病菌檢測方面的穩(wěn)定性良好，同時其檢測速度快，高通量，相比其他方法優(yōu)勢較大。同時對57株細(xì)菌進(jìn)行蛋白指紋圖譜的聚類分析，對菌株之間的同源性進(jìn)行比較，按照50%