豬瘟病毒疫苗C株與流行毒株E2蛋白表達(dá)及其免疫反應(yīng)性比較.pdf

1、豬瘟(classical swine fever，CSF)是由豬瘟病毒(classical swine fever virus，CSFV)引起的一種以豬為專一宿主的高度烈性傳染病。CSFV是具有囊膜的單股正鏈RNA病毒，病毒基因組全長約12.3kb，由一個大的開放閱讀框及兩側(cè)非編碼區(qū)組成。E2為囊膜結(jié)構(gòu)糖蛋白，N端具有B/C、A/D兩個主要抗原區(qū)，能夠刺激機(jī)體產(chǎn)生針對CSFV的特異性中和抗體，是CSFV重要的抗原蛋白。目前控制豬瘟的有效

2、手段是疫苗免疫，其中以我國研制的豬瘟兔化弱毒疫苗（簡稱C株）應(yīng)用最為廣泛。但是豬瘟的優(yōu)勢流行毒株由1型漸轉(zhuǎn)為以2型為主，且病豬常呈溫和型臨床癥狀。這些因素使得對豬瘟進(jìn)行及時有效的診斷和預(yù)防變得更為困難。
　　本研究旨在(1)獲得CSFV1型疫苗C株及浙江地區(qū)2型流行毒株E2原核蛋白及真核蛋白;(2)探明疫苗株和野毒株E2蛋白的免疫反應(yīng)性差異;(3)初步建立基于疫苗株及流行毒株E2蛋白的間接ELISA檢測方法，用于分析免疫血清與感染

3、血清抗體水平變化和抗體效價等。
　　1、CSFV不同毒株E2蛋白原核表達(dá)
　　利用大腸桿菌原核表達(dá)方法獲得了CSFV疫苗C株E2抗原區(qū)蛋白、浙江地區(qū)2型流行毒株E2抗原區(qū)蛋白、HZ毒株E2抗原區(qū)前90個氨基酸截短蛋白。
　　2、CSFV不同毒株E2蛋白真核表達(dá)
　　利用Bac-to-Bac桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)對CSFV疫苗C株、流行HZ毒株及QZ毒株E2蛋白進(jìn)行表達(dá)，獲得純化的C株E2真核蛋白、HZ株E2真核蛋白與Q

4、Z株E2真核蛋白。
　　3、CSFV疫苗C株與流行毒株E2蛋白免疫反應(yīng)性比較
　　用ELISA及免疫印跡(Western blot，WB)方法將疫苗C株與流行毒株E2蛋白和疫苗C株血清、流行毒株QZ株血清分別反應(yīng)，比較免疫反應(yīng)性差異，結(jié)果表明:(1) E2原核表達(dá)蛋白與同源血清反應(yīng)性優(yōu)于異源血清。且HZ毒株包含前90位氨基酸的截短E2原核蛋白與HZ株抗原區(qū)E2蛋白的免疫反應(yīng)性相似。(2)利用C株和流行毒株HZ株的E2原核蛋白

5、作為包被抗原建立了間接ELISA檢測體系，優(yōu)化的體系為每孔包被2μg抗原，血清稀釋度為1∶100，加入5％大腸桿菌裂解液進(jìn)行一抗孵育，SPA稀釋度為1∶20000。(3)應(yīng)用間接ELISA對不同免疫、感染血清的抗體水平進(jìn)行測試，發(fā)現(xiàn)①疫苗C株及重組C株病毒免疫血清與同源的C株E2蛋白的免疫反應(yīng)性顯著優(yōu)于異源的HZ株E2蛋白，效價較高;攜帶HZ株E2基因的重組C株病毒與HZ株E2蛋白的反應(yīng)性優(yōu)于C株E2蛋白，效價較高。②流行毒株感染血清與