豬前體脂肪細(xì)胞的誘導(dǎo)分化及13個群體AFLP多態(tài)性研究.pdf

1、本論文對萊蕪豬前體脂肪細(xì)胞的誘導(dǎo)分化和13個中外豬種(群)的AFLP多態(tài)性進(jìn)行了研究。
　　 脂肪沉積性狀是豬的重要經(jīng)濟(jì)性狀，與豬肉品質(zhì)密切相關(guān)。前脂肪細(xì)胞是一類具有增殖和向脂肪細(xì)胞分化能力的特異化細(xì)胞，對其增殖和分化機(jī)理的深入研究有助于了解脂肪沉積的調(diào)控機(jī)理。萊蕪豬具有較強(qiáng)的脂肪沉積能力，其肌內(nèi)脂肪含量豐富。本研究采集1日齡萊蕪豬仔豬頸、背部皮下脂肪組織，采用膠原酶與胰蛋白酶相結(jié)合的方法，分離原代前體脂肪細(xì)胞，進(jìn)行前體脂肪細(xì)胞

2、的原代和傳代培養(yǎng)，并進(jìn)行前體脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化的研究，以Real－time PCR技術(shù)檢測了前體脂肪細(xì)胞分化過程中關(guān)鍵基因PPARγ的表達(dá)。結(jié)果表明：分離的豬原代前體脂肪細(xì)胞約8h后開始貼壁，貼壁的細(xì)胞呈短梭形或不規(guī)則的三角形，第3天多數(shù)細(xì)胞進(jìn)入指數(shù)生長期，呈成纖維細(xì)胞樣形態(tài)，細(xì)胞生長曲線近似S形；誘導(dǎo)培養(yǎng)結(jié)果顯示，少量細(xì)胞在第2天開始出現(xiàn)脂滴，多數(shù)細(xì)胞在第3天出現(xiàn)脂滴，第7～8天小脂滴開始逐漸融合成較大脂滴，在第12天左右融合成大脂滴，

3、油紅O染色呈橘紅色。在前體脂肪細(xì)胞分化過程中PPARγ基因mRNA的表達(dá)量逐漸增加，在誘導(dǎo)后的48h表達(dá)量最高，隨后其表達(dá)豐度逐漸下降。本實(shí)驗(yàn)成功建立了萊蕪豬前體脂肪細(xì)胞培養(yǎng)體系和體外誘導(dǎo)分化模型，為進(jìn)一步研究萊蕪豬前體脂肪細(xì)胞增殖與分化機(jī)制和豬體脂肪的沉積奠定基礎(chǔ)。
　　 用12對AFLP引物組合檢測了13個中外豬種(群)混合基因組DNA的遺傳變異，并根據(jù)AFLP分析結(jié)果計(jì)算了13個豬種(群)間的遺傳相似系數(shù)，據(jù)此構(gòu)建了UPG

4、MA聚類關(guān)系圖。結(jié)果表明，AFLP標(biāo)記有著很高的多態(tài)檢測效率，平均每對引物檢測到76個多態(tài)位點(diǎn)，多態(tài)性比例為41.99％；觀測的最高等位基因?yàn)?.6056，最低為1.2899，平均觀測等位基因數(shù)目為1.4632；有效等位基因最高為1.4282，最低為1.2050,平均有效等位基因?yàn)?.3276；平均Nei基因多樣度(H)為0.1919，平均信農(nóng)指數(shù)(I)為0.2799。通過UPGMA聚類分析13個豬種(群)分成兩個大類群，中國地方豬種與