浦東機(jī)場(chǎng)口岸蠅類攜帶病原菌的鑒定及消毒劑耐藥性的研究.pdf

1、口岸是物流、人流量較大的地區(qū)，不僅存在疾病傳播的風(fēng)險(xiǎn)，還面臨外來(lái)新物種入侵的可能。蠅類是口岸重要的醫(yī)學(xué)昆蟲(chóng)，攜帶的病菌與膿腫創(chuàng)傷、外科感染、胃腸疾病、食物中毒等密切相關(guān)。所以口岸地區(qū)殺蟲(chóng)消毒、外來(lái)生物監(jiān)測(cè)顯得十分必要。此前對(duì)醫(yī)院分離病原菌耐藥性的研究較多，而對(duì)口岸分離病原菌的消毒劑抗性卻鮮有報(bào)道。
　　本論文結(jié)合生理生化反應(yīng)測(cè)定和16SrRNA序列測(cè)定兩種細(xì)菌鑒定方法，對(duì)2011年4月在上海浦東機(jī)場(chǎng)口岸捕獲的蠅類體表、體內(nèi)攜帶的病

2、原菌進(jìn)行了分離、鑒定。發(fā)現(xiàn)其中一株為之前國(guó)內(nèi)未報(bào)道的條件致病菌Wohlfahrtiimonaschitiniclastica，測(cè)定了其生理生化反應(yīng)，對(duì)其16SrRNA系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)行了分析，并對(duì)其基因組序列進(jìn)行了測(cè)序。另外，對(duì)分離的24株病原菌對(duì)消毒劑的抗性進(jìn)行了測(cè)定，檢測(cè)了攜帶的抗性基因。本研究結(jié)果對(duì)口岸蠅類及蠅媒細(xì)菌的監(jiān)測(cè)提供了依據(jù)，并對(duì)口岸消毒劑的使用有指導(dǎo)意義。
　　一、浦東機(jī)場(chǎng)口岸蠅類攜帶病原菌種類
　　將浦東機(jī)場(chǎng)捕獲

3、的蠅類體表、體內(nèi)細(xì)菌分離培養(yǎng)，單克隆菌株經(jīng)Vitek2Compact微生物自動(dòng)分析及16SrRNA基因序列比對(duì)。結(jié)果在7種蠅體表檢出18種菌，其中致病菌2種，條件致病菌14種，包括1株國(guó)內(nèi)未報(bào)道的條件致病菌株Wohlfahrtiimonaschitiniclastica;蠅體內(nèi)檢出14種菌，其中致病菌1種，條件致病菌12種;攜帶菌種類最多的是醬麻蠅，其次為亮綠蠅。
　　二、Wohlfahrtiimonaschitiniclasti

4、ca的分離、16SrRNA鑒定及分子系統(tǒng)發(fā)育從大頭金蠅體表分離出一株細(xì)菌(實(shí)驗(yàn)編號(hào)為SH04)，對(duì)其16SrRNA序列進(jìn)行PCR擴(kuò)增、測(cè)序，通過(guò)與NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)Blast比對(duì)，該菌與Wohlfahrtiimonaschitiniclastica典型菌株S5的16SrRNA相似度為98.86％，W.chitiniclastica曾在阿根廷引起流浪人員暴發(fā)性膿毒癥。用API20NE和Vitek2兩種方法測(cè)定了SH04菌株的生理生化反應(yīng)，使用

5、Mega5軟件，Neighbour-joining方法，構(gòu)建16SrRNA序列的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)，生理生化反應(yīng)和進(jìn)化樹(shù)分析結(jié)果表明，SH04菌株為上海浦東口岸大頭金蠅體表分離到的W.chitiniclastica菌的新記錄。之后，對(duì)W.chitiniclasticaSH04菌株的基因組進(jìn)行了測(cè)序。
　　三、蠅媒細(xì)菌消毒劑抗性和抗性基因的檢測(cè)
　　從上海浦東機(jī)場(chǎng)捕獲蠅類中分離的細(xì)菌中選取4種共24株病原菌，采用肉湯稀釋法，測(cè)定了對(duì)三