櫛孔扇貝(Chlamys farreri)顆粒血細(xì)胞發(fā)生及其單克隆抗體與五種雙殼貝類血細(xì)胞交叉反應(yīng)的研究.pdf

1、本論文從櫛孔扇貝(Chlamys farreri)血細(xì)胞單克隆抗體庫(kù)中篩選出一株能夠特異性識(shí)別櫛孔扇貝顆粒血細(xì)胞的單克隆抗體,用其作為顆粒血細(xì)胞示蹤分子探針,揭示了櫛孔扇貝顆粒血細(xì)胞的發(fā)生時(shí)間與分布特點(diǎn),檢測(cè)了櫛孔扇貝顆粒血細(xì)胞單克隆抗體與五種雙殼貝類血細(xì)胞的交叉反應(yīng)情況,旨在為貝類血細(xì)胞的發(fā)生、分化和免疫功能研究積累資料。本論文主要包括以下三部分:
　　1櫛孔扇貝顆粒血細(xì)胞單克隆抗體的特性分析分別應(yīng)用間接免疫熒光法、流式免疫熒光

2、法、免疫電鏡法和免疫組化法,從櫛孔扇貝血細(xì)胞單克隆抗體庫(kù)中篩選出一株特異性較強(qiáng)的單克隆抗體(單抗)6C6。間接免疫熒光檢測(cè)發(fā)現(xiàn),單抗6C6能特異性的與櫛孔扇貝顆粒血細(xì)胞結(jié)合,并且其反應(yīng)為強(qiáng)陽(yáng)性;流式免疫熒光檢測(cè)發(fā)現(xiàn),單抗6C6的陽(yáng)性率為59±2.4％,其中陽(yáng)性透明血細(xì)胞(PH)占6±2.3％,陽(yáng)性顆粒血細(xì)胞(PG)占53±2.5％,陽(yáng)性顆粒血細(xì)胞占總陽(yáng)性血細(xì)胞數(shù)的89±2.4％:免疫電鏡檢測(cè)發(fā)現(xiàn),膠體金粒子基本呈點(diǎn)狀密集分布在顆粒血細(xì)胞

3、的胞質(zhì)顆粒上;免疫組化檢測(cè)發(fā)現(xiàn),單抗6C6能特異性識(shí)別扇貝組織中的顆粒血細(xì)胞,并且與其它組織細(xì)胞沒(méi)有交叉反應(yīng)。以上結(jié)果表明:單抗6C6可以作為定位櫛孔扇貝顆粒血細(xì)胞的特異性分子探針,可以為顆粒血細(xì)胞的發(fā)生與分布、血細(xì)胞免疫功能等研究提供工具。
　　2櫛孔扇貝顆粒血細(xì)胞的發(fā)生與分布分別應(yīng)用光鏡微分干涉觀察、半薄切片H&E染色法和單克隆抗體的免疫組化法,通過(guò)櫛孔扇貝不同時(shí)期幼蟲(chóng)(擔(dān)輪幼蟲(chóng)、D形幼蟲(chóng)、殼頂幼蟲(chóng)和匍匐幼蟲(chóng))的免疫組化研究發(fā)

4、現(xiàn),櫛孔扇貝顆粒血細(xì)胞最早出現(xiàn)在D形幼蟲(chóng)期,顆粒血細(xì)胞為球形或橢球形,直徑為3～5μm,分布于D形幼蟲(chóng)的面盤(pán)基部、消化腺內(nèi)、胃壁和消化道壁周圍:櫛孔扇貝殼項(xiàng)幼蟲(chóng)外套膜組織內(nèi)的顆粒血細(xì)胞散在分布,面盤(pán)頂部與食道附近有少量游離顆粒血細(xì)胞的存在,面盤(pán)基部、消化腺內(nèi)及胃的周圍顆粒血細(xì)胞數(shù)量多,相互聚集成簇;櫛孔扇貝匍匐幼蟲(chóng)的外套膜、鰓、消化腺內(nèi)及消化道、胃周圍等組織器官?gòu)V泛分布著大量顆粒血細(xì)胞,直徑為4～6μm,顆粒血細(xì)胞數(shù)量多,形態(tài)多樣。以上

5、結(jié)果表明:櫛孔扇貝顆粒血細(xì)胞最早出現(xiàn)在D形幼蟲(chóng)期,顆粒血細(xì)胞分布于幼蟲(chóng)的面盤(pán)基部、消化腺內(nèi)、胃壁和消化道壁周圍等與攝食、運(yùn)輸和消化功能相關(guān)的組織器官中,可以推測(cè)顆粒血細(xì)胞的這種分布特點(diǎn)與扇貝早期幼蟲(chóng)不完善的免疫防御系統(tǒng)有關(guān)。
　　3櫛孔扇貝顆粒血細(xì)胞單克隆抗體與五種雙殼貝類血細(xì)胞的交叉反應(yīng)分別應(yīng)用斑點(diǎn)印跡法、間接免疫熒光法和流式免疫熒光法,研究櫛孔扇貝顆粒血細(xì)胞單克隆抗體與五種雙殼貝類,包括海灣扇貝、蝦夷扇貝、太平洋牡蠣、紫貽貝和

6、毛蚶血細(xì)胞的交叉反應(yīng)情況。斑點(diǎn)印跡法檢測(cè)發(fā)現(xiàn),單抗6C6與海灣扇貝、蝦夷扇貝、太平洋牡蠣血細(xì)胞反應(yīng)為陽(yáng)性,與紫貽貝、毛蚶血細(xì)胞為陰性反應(yīng);間接免疫熒光檢測(cè)發(fā)現(xiàn),單抗6C6可以和海灣扇貝、蝦夷扇貝、太平洋牡蠣顆粒血細(xì)胞發(fā)生特異性的結(jié)合,呈現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng),但與這三種貝類的透明血細(xì)胞以及紫貽貝、毛蚶血細(xì)胞未發(fā)生特異性結(jié)合;流式免疫熒光檢測(cè)發(fā)現(xiàn),單抗6C6能特異性識(shí)別海灣扇貝、蝦夷扇貝和太平洋牡蠣的顆粒血細(xì)胞,其陽(yáng)性率分別為為15±2.5％,12±