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1、該研究以黑穗醋栗為試材進(jìn)行組織培養(yǎng)和遺傳轉(zhuǎn)化的初步研究,該研究構(gòu)建了osCDPK7基因和osMAPK4基因的植物表達(dá)載體;建立了黑穗醋栗莖尖再生體系;利用基因槍法和農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將osCDPK7基因和osMAPK4基因轉(zhuǎn)化黑穗醋栗,以期獲得轉(zhuǎn)基因植株,來(lái)增強(qiáng)作物抗逆性.該研究主要研究結(jié)果如下:1.載體構(gòu)建構(gòu)建了2個(gè)植物表達(dá)載體PBC7E12和PBME12.載體PBC7E12上帶有組成型啟動(dòng)子E12調(diào)控的osCDPK7基因,植物篩選標(biāo)記為n
2、ptⅡ基因.載體PBME12上帶有組成型啟動(dòng)子E12調(diào)控的osMAPK4基因,植物篩選標(biāo)記為nptⅡ基因.2.黑穗醋栗再生體系的建立(1)黑穗醋栗愈傷組織的誘導(dǎo)利用黑穗醋栗葉片、葉柄和莖段誘導(dǎo)愈傷組織,研究了不同PGR配比對(duì)黑穗醋栗愈傷組織誘導(dǎo)的影響,為下一步通過(guò)愈傷組織誘導(dǎo)不定芽奠定了基礎(chǔ).(2)黑穗醋栗莖尖培養(yǎng)培養(yǎng)基的確定確定了黑穗醋栗莖尖最佳分化和繼代培養(yǎng)基為MS+1 mg/L BA,30g/L蔗糖,0.8﹪瓊脂,pH5.8.最佳
3、從生芽生根培養(yǎng)基為1/2MS,30g/L蔗糖,0.8﹪瓊脂,pH5.8.3.基因槍法對(duì)黑穗醋栗莖尖的遺傳轉(zhuǎn)化確定莖尖分化階段卡那霉素的篩選壓力為25mg/L.叢生芽生根階段卡那霉素篩選壓力為20mg/L.利用基因槍法轉(zhuǎn)化黑穗醋栗莖尖獲得抗性芽,抗性芽率為8.4﹪.4.農(nóng)桿菌介導(dǎo)法對(duì)黑穗醋栗莖尖的遺傳轉(zhuǎn)化利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化黑穗醋栗莖尖獲得抗性芽,抗性芽率為10.5﹪.5.轉(zhuǎn)基因植株的分子檢測(cè)基因槍法轉(zhuǎn)化獲得的抗性植株,經(jīng)PCR檢測(cè),獲得
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