改造狂犬病毒探索小鼠下丘腦攝食相關(guān)核團的神經(jīng)環(huán)路.pdf

1、探究動物的攝食行為，不論是對畜牧業(yè)生產(chǎn)效益的提升，還是對人類代謝相關(guān)疾病的研究都有重大的科研價值。以往的研究表明，中樞神經(jīng)系統(tǒng)在動物攝食行為產(chǎn)生的過程中發(fā)揮了重要的調(diào)控作用，而下丘腦是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中調(diào)節(jié)動物代謝的關(guān)鍵部位。本課題的目的旨在通過改造狂犬病毒，將其作為神經(jīng)環(huán)路示蹤工具，對下丘腦中攝食相關(guān)核團的神經(jīng)環(huán)路進行探究。
　　本實驗主要分為三個部分:第一，利用缺失病毒毒力基因G蛋白、帶有熒光蛋白的狂犬病毒，針對下丘腦區(qū)域的五個攝

2、食相關(guān)核團——下丘腦室旁核、下丘腦背內(nèi)側(cè)核、下丘腦腹內(nèi)側(cè)核、弓狀核、下丘腦外側(cè)區(qū)，在全腦范圍內(nèi)示蹤對其有軸突投射的神經(jīng)元。實驗結(jié)果顯示，主要有額眶部皮層、外側(cè)隔核、視前內(nèi)側(cè)區(qū)、視前內(nèi)側(cè)核、終紋床核、杏仁核、腹側(cè)被蓋區(qū)、藍斑、臂旁核、水管周灰質(zhì)等核團將其軸突投射到了下丘腦這五個核團;第二，構(gòu)建EnvA/TVA病毒示蹤體系，實現(xiàn)狂犬病毒“定位、跨突觸可受調(diào)控”的感染模式，最終該示蹤體系構(gòu)建成功并在鼠腦上得到驗證;第三，為了構(gòu)建含有水泡性口炎

3、病毒和狂犬病毒嵌合G蛋白的B7B-VSV SADG細胞系，從而實現(xiàn)狂犬病毒對注射區(qū)域神經(jīng)元的胞體集中且高效的感染模式。利用CRISPR/Cas9技術(shù)手段，改造B7GG細胞——將該細胞系基因組中的G蛋白變?yōu)榍逗螱蛋白，并將藍色熒光蛋白替換掉綠色熒光蛋白，最終利用潮霉素壓力篩選和流式細胞儀對細胞系進行了純化，后期可通過進一步擴大培養(yǎng)完成細胞系的建立。
　　對動物攝食行為有調(diào)控作用的神經(jīng)系統(tǒng)錯綜復(fù)雜，利用靈活高效的嗜神經(jīng)性病毒作為示蹤工