豬HOXA11基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控研究.pdf

1、母豬產(chǎn)仔數(shù)的高低是衡量豬繁殖性狀的重要指標，也是決定企業(yè)經(jīng)濟效益的關(guān)鍵因素，但由于豬本身的制約性，使得遺傳改良進展緩慢。隨著基因工程技術(shù)的發(fā)展，利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)培育新品種已成為如今育種工作的主要途徑，而動物種質(zhì)資源的創(chuàng)新也進入到了一個全新的發(fā)展時期。研究表明，HOXA11基因在子宮內(nèi)膜形態(tài)的構(gòu)建、子宮周期性形態(tài)的變化、子宮容受性的建立、胚胎的著床及附植等方面發(fā)揮著重要的作用，且HOXA11基因受雌激素、孕激素等多種因素的調(diào)控。本實驗選取與

2、豬繁殖性狀密切相關(guān)的HOXA11基因作為研究對象，對其轉(zhuǎn)錄調(diào)控機制進行初步分析研究，主要獲得以下結(jié)果：
　　 (1)利用比較基因組學和RT-PCR的方法，克隆了豬HOXA11基因的cDNA序列，得到該基因的CDS全長，共951bp。同時分析了該基因的結(jié)構(gòu)，豬HOXA11基因含有兩個外顯子，72bp的5'UTR和1576bp的3'UTR。
　　 (2)利用RT-PCR的方法，檢測了豬HOXA11基因在成年梅山豬的心臟、肝臟

3、、脾臟、肺臟、腎臟、胃、小腸、肌肉、淋巴和子宮內(nèi)膜10個組織中的，結(jié)果顯示豬HOXA11基因在子宮內(nèi)膜特異表達，在其他幾個組織中幾乎不表達。
　　 (3)在大白和梅山這兩個品種的四個不同時期(發(fā)情15天、妊娠15天、妊娠26天、妊娠50天)對HOXA11基因的表達情況進行了檢測，結(jié)果顯示在大白豬中，妊娠15天時該基因的表達量要高于其他時間點，在妊娠50天時，表達量最低；而在梅山豬中，從發(fā)情15天一直到妊娠26天，HOXA11基因

4、持續(xù)高表達，但在妊娠50天時，該基因的表達量也同樣降低。
　　 (4)通過生物信息學的方法，克隆了豬HOXA11基因的啟動子序列，并構(gòu)建了5’端缺失啟動子載體，分析雙熒光素酶活性檢測結(jié)果顯示，豬HOXA11基因2kb啟動子載體具有較高的啟動活性，是pGL3-Basic空載體活性的5倍；對該基因的啟動子序列進行預測分析后發(fā)現(xiàn)，該啟動子可能與轉(zhuǎn)錄因子AP-1、c-JUN、OCT-1、GATA-3有較高的結(jié)合活性；將該啟動子載體分別轉(zhuǎn)

5、染PK15、C2C12和Ishikawa細胞系，分析結(jié)果后發(fā)現(xiàn)該啟動子并非子宮內(nèi)膜特異表達，在其他兩種細胞系中也有表達，但活性低于子宮內(nèi)膜的活性。
　　 (5)孕酮體外注射懷孕小鼠，分別采用2mg和4mg的劑量，以未處理的正常懷孕小鼠作為陰性對照，分別在懷孕4天、5天和6天采集小鼠子宮內(nèi)膜樣品，分析HOXa11基因的表達情況，結(jié)果顯示體外孕酮刺激可提高小鼠子宮內(nèi)膜HOXa11基因的表達，且2mg的效果要好于4mg，但在懷孕6天，