內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞協(xié)同孕激素對HOXA11基因負(fù)調(diào)控機(jī)制的研究.pdf

1、研究背景：同源框基因(homebox gene HOX)是一類與胚胎發(fā)育和細(xì)胞分化相關(guān)的基因，其表達(dá)的蛋白質(zhì)是一類轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，主要調(diào)控脊椎動物的體節(jié)分化和確定胚胎前后分化關(guān)系。HOX基因中都包含了一個由183個堿基對(bp)組成的、高度保守的同源框序列。HOXA11基因是HOX基因家族中的一員，在成年哺乳動物中，HOXA11基因主要表達(dá)于子宮和宮頸。近年國外有關(guān)研究報道顯示：HOXA11基因在人的子宮發(fā)育和胚泡著床過程中都起著重要作用

2、。 目前認(rèn)為性激素對子宮內(nèi)膜的多種調(diào)節(jié)作用主要通過HOX基因介導(dǎo)完成。HOX基因的異常表達(dá)與多種婦科疾病(不孕、流產(chǎn)、內(nèi)膜異位及腫瘤)相關(guān)。本課題組已往的研究結(jié)果顯示，HOXA11基因在人子宮內(nèi)膜的表達(dá)隨體內(nèi)卵巢性激素水平不同而呈周期性變化，尤其在分泌中期，內(nèi)膜腺上皮HOXA11的表達(dá)量明顯降低以至消失。提示在體內(nèi)孕激素對內(nèi)膜腺上皮HOXA11基因起負(fù)調(diào)控作用。這種負(fù)調(diào)控作用與分泌中期內(nèi)膜的分化、成熟以及子宮接受態(tài)(recept

3、ive state)的形成密切相關(guān)。然而，體外研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)上皮細(xì)胞與基質(zhì)細(xì)胞分離培養(yǎng)時，孕激素不能使上皮細(xì)胞HOXA11基因表達(dá)量下降，反而使其表達(dá)量增加，只有當(dāng)上皮細(xì)胞與基質(zhì)細(xì)胞共培養(yǎng)時，孕激素才使上皮細(xì)胞HOXA11基因表達(dá)量下降，且這種負(fù)調(diào)控作用可被孕激素受體拮抗劑(RU486)所抑制。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生的某種或某些孕激素依賴因子與內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞中的孕激素受體PR共同介導(dǎo)完成孕激素對內(nèi)膜腺上皮HOXA11基因表達(dá)的負(fù)

4、調(diào)控作用。但是，基質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生何種孕激素依賴因子下調(diào)腺上皮HOXA11的表達(dá)，目前尚不清楚。 研究目的：探討基質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生的孕激素依賴因子是否與基質(zhì)細(xì)胞HOXA11基因調(diào)控的下游基因表達(dá)產(chǎn)物有關(guān)。 實驗方法：主要采用雙鏈RNA干擾(RNA interference，RNAi)技術(shù)將HOXA11小型干擾RNA(small interfering RNA，siRNA)轉(zhuǎn)入原代培養(yǎng)的人子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞中，抑制內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞HOXA1

5、1基因的表達(dá)，再將基質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)液與內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞共培養(yǎng)，同時加入孕酮；用RT-PCR和Western-blot檢測腺上皮細(xì)胞HOXA11表達(dá)情況，從而證明基質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生的孕激素依賴因子是否與基質(zhì)細(xì)胞HOXA11基因調(diào)控的下游基因表達(dá)產(chǎn)物有關(guān)。 結(jié)論：1．干擾試劑Hs-HOXA11-4-HP siRNA對基質(zhì)細(xì)胞HOXA11基因的表達(dá)抑制作用具有瞬時性；2．內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞可產(chǎn)生某種或某些孕激素依賴因子參與孕激素對內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞HOXA