亞硝酸鹽降解菌AQ-3的分離鑒定及安全性研究.pdf

1、近年來,隨著我國集約化水產(chǎn)養(yǎng)殖的快速發(fā)展,池塘老化、放養(yǎng)密度過高、投飼殘餌過多等諸多因素普遍引起養(yǎng)殖水體中亞硝酸鹽超標(biāo),屢屢發(fā)生水產(chǎn)養(yǎng)殖動物中毒死亡事件。物理法、化學(xué)法等常用的亞硝酸鹽降解辦法存在很大的局限性,效果也不理想,生物法以其更有效、價格更低廉等優(yōu)點深受廣大養(yǎng)殖戶的青睞,因此,篩選具有良好降解效果、在養(yǎng)殖水體穩(wěn)定安全的亞硝酸鹽降解菌,對水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展是十分必要的,并且具有廣泛的應(yīng)用前景。雖然亞硝酸鹽降解菌得到廣大學(xué)者的關(guān)注,對

2、其研究也變得逐步深入和廣泛,但實際養(yǎng)殖中,亞硝酸鹽中毒引起死亡事故仍然時有發(fā)生,亞硝酸鹽氮超標(biāo)問題仍未得到根本解決。我國對亞硝酸鹽降解菌的研究起步相對較晚,研究基礎(chǔ)也相對薄弱,許多問題尚未弄清楚,相關(guān)研究中存在很多問題。尤其是菌株的安全性未得到重視,養(yǎng)殖水體中大量投入外來菌株,存在很多安全隱患,可能會對水產(chǎn)養(yǎng)殖動物甚至對人類造成威脅,益生菌的安全性值得重視。本論文針對亞硝酸鹽降解菌優(yōu)良菌種匱乏,從養(yǎng)殖水體中分離、篩選到一株降解特性優(yōu)良的

3、菌株,并對其對水產(chǎn)養(yǎng)殖動物和水體環(huán)境的安全性進行了初級評價?，F(xiàn)分別報道如下:
　　實驗從養(yǎng)殖污泥中分離篩選了一株優(yōu)良的亞硝酸鹽去除菌AQ?3,其對亞硝酸鹽的去除率高達99.47％。通過API ID32GN細菌鑒定系統(tǒng)以及16S rDNA序列分析法,菌株AQ?3被鑒定為鮑氏不動桿菌(Acinetobacter baumannii)(GenBank登錄號:JF751054.1),其16S rDNA序列與基因庫中不動桿菌屬菌株的16S

4、rDNA序列有99%?100%的同源性,而且與不動桿菌TW(GenBank登錄號:FJ753401.1)的親緣關(guān)系最近。菌株AQ?3去除亞硝酸鹽的最適初始pH范圍為7?9,最佳碳源為乙酸鈉和丁二酸鈉,而且隨著初始菌濃度的不斷增大,菌株AQ?3對亞硝酸鹽的去除率顯著升高;隨著亞硝酸鹽氮濃度的不斷增大,菌株AQ?3對亞硝酸鹽的去除率逐漸降低。
　　實驗對分離的亞硝酸鹽降解菌AQ-3的致病性和耐藥性進行了分析。對分離菌株AQ-3進行了a

5、erA、hlyA、ahpA、alt、ast五種重要致病基因的檢測,結(jié)果顯示,菌株AQ-3不具有這五種致病基因,為了進一步驗證其致病性和感染性,我們對小白鼠和鯽魚分別進行了口灌,分析其血液指標(biāo)的變化,進行毒性實驗觀察,血液指標(biāo)正常,未發(fā)現(xiàn)死亡或其他發(fā)病等不正常癥狀,因此,我們初步認(rèn)定菌株AQ-3不具有致病性和感染性。同時,對菌株AQ-3進行耐藥性檢測,結(jié)果顯示菌株AQ-3對水產(chǎn)常用抗菌藥均極度敏感,進一步為其安全性提供佐證。
　　實

6、驗評價了分離的亞硝酸鹽降解菌 AQ-3的環(huán)境安全性。方法參照《GB/T21805-2008化學(xué)品藻類生長抑制試驗》、《GB/T13266-91水質(zhì)物質(zhì)對蚤類(大型蚤)急性毒性測定方法》、《GB/T13267-91水質(zhì)物質(zhì)對淡水魚(斑馬魚)急性毒性測定方法》、《漁藥臨床試驗技術(shù)規(guī)范》等國家標(biāo)準(zhǔn)及相關(guān)法規(guī),觀察了亞硝酸鹽降解菌AQ-3對小球藻生長抑制作用以及對大型蚤、斑馬魚的急性毒性,分析了其對養(yǎng)殖水體主要理化因子的影響。結(jié)果顯示,亞硝酸鹽